SN_T 4546-2017商品化试剂盒检测方法 金黄色葡萄球菌 方法一.pdf

S学中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4546--2017代替 SN/T 1895—2007商品化试剂盒检测方法方法一金黄色葡萄球菌Commercial kit method--Staphylococcus aureus --Test method I2017-05-12 发布2017-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局华 SN/T 4546-2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1895一2007《食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法PetrifilmTM测试片法》。与SN/T1895--2007相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改了标准的中英文名称；-修改了附录A：一增加了计算公式；—增加了附录 B;一删除了第二法PetrifilmTM测试片MPN法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、大连启元科技发展有限公司。本标准主要起草人：蒋丹、刘淑艳、孙晓飞、丁健、万超、赵红阳、吴斌、林长军、卢行安、周振亚。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1895---2007。 SN/T 4546—2017商品化试剂盒检测方法金黄色葡萄球菌方法一1范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌检验测试片（PetrifilmTMStaphylococcus aureus Count Plate)的检测方法。本标准适用于出口食品和原料中金黄色葡萄球菌的计数。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室　生物安全通用要求3生物安全措施为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测。所有培养物和废弃物的处理应按照GB19489有关规定执行。4技术概要金黄色葡萄球菌测试片法是用一种预先制备的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养基系统进行微生物培养的方法。金黄色葡萄球菌测试片 STX（Staph Express Count Plate）含有具有显色功能并经改良的 Baird-Parker培养基，对金黄色葡萄球菌具有很强的选择性。测试片上的紫红色菌落为金黄色葡萄球菌。若出现除紫红色以外的其他颜色，则必须使用含有显色剂和脱氧核糖核酸(DNA)的确认反应片。金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶(DNase)会和反应片中的显色剂形成粉红色晕圈。5设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1恒温培养箱：36℃士1℃。5.2电子天平：感量0.1g。5.3均质器(旋刀式或拍击式)或等效的设备。5.4　pH计或精密pH试纸:精密度0.1。5.5移液管：1 mL（具0.01 mL刻度），10 mL（具0.1 mL刻度)或移液器及吸头。5.6测试片压板。5.7放大镜或/和菌落计数器。m SN/T 454620176 培养基和试剂6.1无菌生理盐水：见附录A的A.1。6.2磷酸盐缓冲液：见附录 A的A.2。6.31 mol/L NaOH:见附录 A 的 A.3。6.4 1 mol/L HCl:见附录 A 的 A.4。6.5金黄色葡萄球菌测试片和金黄色葡萄球菌确认反应片。本标准使用的试剂盒由3M公司生产，参考SN/T2775—2011和SN/T3266—2012由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录B。试剂盒储存于2℃～8℃,有效期18个月。 检测程序7检测程序见图1。检样25 g(mL) +225 mL 生理盐水1 mL接种量，检样匀液加入测试片36 ℃±1℃24 h±2 h判读无菌落紫红色菌落其他颜色的菌落在测试片中置入确认反应片计数金黄色葡萄球菌菌落36 ℃±1 ℃培养1 h～3 h36 ℃±1℃1 h～3 h计数有粉红色晕的菌落为金黄色葡萄球菌报告图1冷水可溶性金黄色葡萄球菌凝胶测试片快速计数法检测程序2 SN/T 4546--20178操作步骤8.1样品制备8.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯中，8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2min，或放人盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。8.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225ml.磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品勾液。样品匀液的pH值应为6.5～7.5,pH值过低或过高时可分别采用1mol