水质 灭菌指示微生物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定 生物学检测法（征求意见稿）.pdfVIP

目 次 言ii 1 适用范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 方法原理 1 5 干扰和消除 2 6 试剂和材料 2 7 仪器和设备 2 8 样品 3 9 分析步骤 3 10 结果与报告 6 11 特异性和稳定性 6 12 质量保证和质量控制 7 13 废物处理 7 附录A （规范性附录） 培养基和试剂 8 附录B （规范性附录） 培养基和试剂使用说明 14 i 前 言 为贯彻 《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态 环境，保障人体健康，规范水中灭菌指示 生物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定方法，制 定本标准。 本标准规定了鉴定经灭菌处置的废水中灭菌指示 生物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的生 物学检测方法。 本标准的附录A和附录B为规范性附录。 本标准为首次发布。 本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。 本标准起草单位：上海市环境监测中心。 本标准验证单位：江苏省环境监测中心、浙江省环境监测中心、江苏省常州环境监测中 心、上海市松江区环境监测站、上海市长宁区环境监测站和上海市青浦区环境监测站。 本标准生态环境部20 □□年□□月□□日批准。 本标准自20 □□年□□月□□日起实施。 本标准由生态环境部解释。 ii 水质 灭菌指示微生物 （枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定 生物学检测法 警告：操作时应按要求佩戴防护器具，做好无菌防护；实验室操作需在无菌操作设备内 进行，避免吸入呼吸道或接触皮肤和衣物。 1 适用范围 本标准规定了鉴定水中灭菌指示 生物的生物学检测方法。 本标准适用于经灭菌处置的废水中指示 生物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定。 2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本 标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 HJ 494 水质 采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 3 术语和定 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 枯草芽孢杆菌黑色变种 Bacillus subtilis var. niger 在含酪氨酸的培养基上形成黑色色 的革兰氏阳性芽孢杆菌，其营养细胞呈杆状，单个 或呈短链状排列，芽孢椭圆形，中生，不膨大，能利用甘油、甘露糖，还原硝酸盐，水解淀 粉，不能利用苦杏仁苷、甘露醇。 4 方法原理 灭菌处置后的废水通过孔径为0.45 μm 的滤膜过滤，细菌和芽孢被截留在滤膜上，然后 将滤膜置于酪氨酸选择性培养基上，37℃培养72 h～96 h，枯草芽孢杆菌黑色变种产生的酪 氨酸酶可分解利用酪氨酸形成黑色 ，产生黑色的特征菌落。对特征菌落进行染色镜检和生 化试验做进一步鉴定，枯草芽孢杆菌黑色变种为革兰氏阳性芽孢杆菌，营养细胞呈杆状，单 个或呈短链状排列，芽孢椭圆形，中生，不膨大，能利用甘油、甘露糖，还原硝酸盐，水解 淀粉，不能利用苦杏仁苷、甘露醇。根据结果报告检出或未检出枯草芽孢杆菌黑色变种。 1 5 干扰和消除 5.1 活性氯具有氧化性，能破坏 生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1） 时加入硫代硫酸钠溶液 （6.13）消除干扰。 5.2 重金属离子具有细胞毒性，能破坏 生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品 采集 （8.1）时加入乙二胺四乙酸二钠溶液 （6.14）消除干扰。 6 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水应满足GB/T 6682 中三级