SN_T 3293-2012水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3293-2012水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的检疫鉴定方法Detection and identification of narcissus mosaic virus, narcissuslatent virus and narcissus yellow stripe virus2013-05-01实施2012-10-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的检疫鉴定方法SN/T 3293—-2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 www.spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.75字数 17千字2013年3月第一版反　2013年3月第一次印刷印数1—1600*书号：155066·2-24691 SN/T 3293—2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中国检验检疫科学院究院、福建农林大学。本标准主要起草人：沈建国、廖富荣、张永江、林双庆、王念武、虞赞、闫诚、黄可辉、翁瑞泉、吴祖建。1 SN/T 3293—2012水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的检疫鉴定方法1范围本标准规定了水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒检测的程序和方法本标准适用于进出境水仙中水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的检测。2　方法原理水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒、水仙黄条病毒的血清学和分子生物学特性是制定本检疫鉴定方法的主要依据。三种病毒的分类地位、寄主范围、病害症状、分布地区、传播途径、粒体形态、基因组等参见附录A。3仪器设备、用具及试剂3.1仪器设备高速冷冻离心机、微量天平（1/1000g）、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、一20℃低温冰箱、一80℃超低温冰箱、凝胶成像分析系统、pH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、超净工作台、酶标仪等。3.2用具各种量程的可调移液器（1000μL、200μL、100μL、20 μL、10μL、2μL）、PCR 反应管、无 RNase离心管（1.5mL）、研钵、酶联板等。3.3试剂酶联板捕获抗原酶联免疫吸附测定法(Plate-trapped antigen ELISA,PTA-ELISA)试剂见附录 B、RT-PCR 试剂见附录 C。4检测与鉴定4.1 PTA-ELISA具体方法见附录B。4.2 RT-PCR具体方法见附录C。 SN/T 3293—20125结果判定与记录5. 1 结果判定当水仙花叶病毒PTA-ELISA、RT-PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时，则判定为检出水仙花叶病毒。当水仙潜隐病毒PTA-ELISA、RT-PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时，则判定为检出水仙潜隐病毒。当水仙黄条病毒PTA-ELISA、RT-PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时，则判定为检出水仙黄条病毒。若任一病毒仅PTA-ELISA或RT-PCR为阳性，则需进一步采用电镜鉴定或PCR产物序列测定等方法进行鉴定。5.2结果记录记录好各项实验数据，包括样品来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。血清学检测结果保留吸光值的数据报告，分子生物学检测结果保留电泳照片。6样品的保存经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在一20℃-80超低温冰箱中，并作好登记和标记工作，以备复核用。 SN/T 3293--2012附录A(资料性附录)水仙花叶病毒、水仙潜隐病毒和水仙黄条病毒的背景资料A.1分类地位水仙花叶病毒：学名:Narcissus mosaic virus，缩写:NM。分类地位：线性病毒科（Flexiviridae）、马铃薯X病毒属（Potervirul）水仙潜隐病毒：学名:Narcissus latent virus,缩写:NIV分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae）、柘橙病毒属（Macluravirus）。水仙黄条病毒学名:Narcissus yellow stripe virus,缩写:NYSV分类地位：马铃薯Y病毒科（Pptyviridac）、马铃薯-Y-病毒属Potypirus）。A.2 寄主范围NMV：自然寄主主要为黄水仙（Narcissus pseudonarcissus；NLV：自然寄主主要包括黄水仙(Narcissus pseudonarcissus)、鸢尾(f