SC_T 7218.2-2015指环虫病诊断规程 第2部分：页形指环虫病.pdf

ICS 65.020.30B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7218.2—2015指环虫病诊断规程第2部分：页形指环虫病Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis--Part 2 : Infection with Dactylogyrus lamellatus2015-02-09发布2015-05-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7218. 2-2015前言SC/T 7218《指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病；第2部分：页形指环虫病；-第3部分：指环虫病；第4部分：坏鳃指环虫病；本部分是《指环虫病诊断规程》的第2部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本部分由农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治监测总站。本部分主要起草人：曹杰英、张志华、刘文青、李全振、李凤超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良。I SC/T 7218. 2-—2015指环虫病诊断规程第2部分：页形指环虫病1范围本部分规定了页形指环虫病的流行情况与临床症状，以及页形指环虫（Dactylogyrus lamellatus）采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法，本部分适用于草鱼等淡水鱼类患页形指环虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T 7103水生动物产地检疫采样技术规范3i试剂和材料3.1水：配置试剂用水应符合GB/T 6682中一级的规定。3.2乙醇：分析纯。3.3Taq酶：一20℃保存,不得反复冻融或温度剧烈变化。3. 4 dNTPs:含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 10 mmol/L的混合物。3.5 上游引物 F:5- TTATGTGGACCTCTGT-3。3.6 下游引物 R:5- AGCCGAGTGATCCACCA -3。3. 7 DNA Marker:2 000 bp、1 000 bp.750 bp、500 bp、250 bp、100 bp。3.8其他试剂见附录 A。4仪器和设备4.1体视显微镜和生物显微镜。4. 2台微尺、目微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪。4.4紫外透射仪或凝胶成像仪。4.5电泳仪。4.6普通冰箱和超低温冰箱。4.7，离心机和离心管。4.8，电子天平。4. 9恒温水浴箱和微波炉。4.10微量移液器及吸头。4.11解剖盘、剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖玻片、橡皮泥、培养皿和吸管。1 SC/T 7218. 2--20155 流行情况与临床症状5.1流行情况页形指环虫能感染草鱼（Ctenopharyngodom idellus）等。全国各地均可发生·发病高峰水温为20℃~25℃。5. 2 临床症状页形指环虫主要寄生于鱼的鳃部。病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿胀、贫血，有斑点状淤血，鳃上有大量黏液，重度感染时，鳃丝显著肿胀，鳃盖张开，病鱼极度不安、窜动、狂游，或游动缓慢、呼吸困难、上浮水面而死。6指环虫采集与固定6.1 病鱼采集捞取具有典型症状的鱼。如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼用80%乙醇固定。样品封存和运输应符合 SC/T 7103的规定。6.2指环虫样品的采集用针刺鱼脑，将鱼杀死。完整的取下全鳃，用小剪刀将鳃片分离，取一片鳃置于培养皿中.洒水少许。用解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片上。在盖玻片的四角涂少量橡皮泥避免盖玻片将虫体直接压碎，用镊子轻压盖玻片，显微镜下观察。6.3指环虫样品的固定与保存加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取一个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片，用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到水基本吸干为止。加上-滴APG溶液（见A.1)到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的虫体样品用70%乙醇保存，用于分子检测的虫体样品用95%乙醇保存。7页形指环虫的鉴定7.1页形指环虫的形态学鉴定显微镜下指环虫前端有2对头器、2对黑色眼点，呈方形排列，此为判断指环虫的简易特征。微调焦距即可观察到指环虫后吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指环虫靠近头部端可观察到交接器.后吸器与交接器是指环虫鉴定的重要特征。根据需要用镊子轻压盖玻片以凸显几丁质结构进行拍照。页形指环虫虫体扁平，体长0.192mm～0.529mm，宽0.072mm～0.136mm。中央大钩有较长的内突，内突端部各有一略呈三角形的附