SN_T 2910.5-2013出口辐照食品检测方法 第5部分：直接落射荧光滤膜-需氧菌计数法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2910.5-2013出口辐照食品检测方法第5部分：直接落射荧光滤膜-需氧菌计数法Determination of irradiated food for export--Part 5 : Direct epifluorescent filter and aerobic plate count method2013-03-01发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局徐度套真 SN/T 2910.5-2013前言SN/T2910《出口辐照食品检测方法》共分为5个部分：第1部分：电子自旋共振波谱法；第2部分：单细胞凝胶电泳法；第3部分：气相色谱-质谱法；-第4部分：热释光法；第5部分：直接落射荧光滤膜-需氧菌计数法。本部分为SN/T2910的第5部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张海滨、刘伟、赵良娟、王乃福、刘国红、戴世泰、郑文杰。 SN/T 2910.5—2013出口辐照食品检测方法第5部分：直接落射荧光滤膜-需氧菌计数法1范围SN/T2910的本部分规定了辐照食品的直接落射荧光滤膜与需氧菌计数检测方法。本部分适用于经5.0kGy及以上剂量处理的辐照调味料及辐照脱水蔬菜辐照初筛鉴定检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定3缩略语下列缩略语适用于本文件。DEFT:直接落射荧光滤膜技术(direct epifluorescent filter technique)APC:需氧菌计数(aerobic plate count)4检验原理本方法是将由DEFT菌体计数结果与APC计数结果进行对比。通过APC检测得出可能辐照过的样品中活菌数，DEFT检测得出样品中微生物总数，包括已失活的微生物。以DEFT与APC差值与特定阈值比较，高于阈值表明样品可能经过辐照处理，低于阈值则未经辐照处理。其他可使微生物死亡的食品加工处理（例如，加热处理)也会导致相似的DEFT值与APC值之差，因此，应对阳性结果进行确证。将一定体积的样液通过滤膜减压过滤以在滤膜上收集微生物。以吖啶橙荧光染色微生物，可使其在450nm～490nm蓝光下产生橙色至橙黄色荧光。这些微生物可通过荧光落射显微镜计数得到DEFT值。在辐照前已死亡的微生物呈现绿色荧光不进行计数。另取一部分同一测试样品平行检测APC 值。5设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备及材料如下：5.1薄膜过滤器：不锈钢或玻璃制，底部为烧结玻璃或不锈钢，配合直径为25mm滤膜，过滤塔容积大于等于10 mI。过滤塔与底座竖直安装于吸滤瓶口上方，也可安装于连接有带压力调节阀的水泵或真1 SN/T 2910.5—2013空泵的多头支管上。过滤时的真空度一般应为70kPa左右。5.2抽滤漏斗：同时配置玻璃吸滤瓶，用于无菌过滤试剂和稀释液。5.3纤维素酯或同等材质滤膜：孔径0.2μm，直径30mm和/或47mm。用于无菌过滤试剂。5.4聚丙烯滤膜：直径25mm，孔径10 um，用于预过滤样液。5.5白色聚碳酸脂滤膜：直径25mm，孔径大小0.6μm，用于样液滤膜过滤。5.6无菌滤纸：用于预过滤样品悬液。落射荧光显微镜：具有适宜的光源和滤镜组（波长450nm～490nm）。5.7落射荧光显微镜镜头：100倍没人式物镜，10倍目镜。5.85.9显微镜载玻片：长×宽：76 mm×26mm。5.10²盖玻片：长×宽:25mm×l50 mm，厚度与物镜匹配。浸镜油：无荧光，折射指数1.515～1.518。5.11镜台测微计：刻度0.01mm，用于测量显微镜视野内的直径。5. 125.13游标卡尺。高压灭菌器。5.145.15干热灭菌箱。涡旋振荡器。5.16培养箱：30℃±1℃。5.175.18恒温水浴箱：46℃±1℃5. 19电子天平：感量0.1g。，1000m或具旋盖的试剂瓶5.20玻璃锥形瓶：100mL,500/试管：用于梯度稀释样液5.21ml刻度），2mL(具0:02 mL刻度）、5mL（具0.05ml.刻度）和10 ml无菌吸管1mL（具0.05. 22（具0.1mL刻度）或移液器及级头+a5.23培养皿:直径 90 mm。5.24镊子。菌落计数器（选用）。5.25半自动或全自动DEFT计数仪（选用）。5.266培养基和试剂6.1 无菌生理盐水:见附录 A中 A.2。6.2 缓冲溶液:见附录 A中