SN_T 1607-2017出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法 疏水栅格滤膜法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1607--2017代替SN/T1607--2005出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法Total bacterial count,coliforms, fecal coliforms and Escherichia coli countsin drinks for export-Hydrophobic grid membrane filtration (HGMF) method2018-03-01实施2017-07-21发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 1607—2017前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1607一2005《进出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法》。本标准与SN/T1607--2005相比主要技术变化如下：一增加了术语和定义；-修改了范围、方法提要；—一细化了试样制备;-在计数时采用了最近似值；一增加了结果的报告方式。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：韩伟、许镇坚、宁雪。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：--SN/T 1607--2005。 SN/T 1607—-2017出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法疏水栅格滤膜法1 范围本标准规定了出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数方法疏水栅格滤膜法。本标准适用于出口包装饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的计数。2.术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1疏水栅格滤膜hydrophobic grid membrane filtration; HGMF孔径为0.45μm的微孔滤膜,其表面采用无毒疏水材料印有网格，形成和已知大小和数量相等的小方格。2.2最近似值 most probable number ;MPN基于概率理论估算细菌浓度的一种间接计数方法。3方法提要一定量的饮料样液通过疏水栅格滤膜时，其中的细菌被截留在疏水栅格内，在指定培养基上培养后，菌落在栅格之内呈限定生长，计数含特定菌落的栅格数，并通过指定公式换算出细菌的最近似数值。4设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下。4.1疏水栅格滤膜：孔径为0.45 um。4.2疏水栅格滤器。4.3抽滤设备。4.4培养箱:36℃±1℃,44.5℃±0.5℃。4.5²无菌吸管:1.0 mL 和10.0 mL,分刻度分别为 0.1 mL和 1.0 ml。5培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。5.1胰化大豆坚固绿琼脂(TSAF）：见附录 A中 A.1。11 SN/T 1607—20175.2m-FC琼脂:见 A.2。5.3胰化大豆硫酸镁琼脂（TSAM）：见A.3。5.4胰蛋白陈胆汁琼脂（TBA）：见A.4。5.5哚试剂：见A.5。5.6无菌生理盐水。6试样制备6.1细菌含量较低的样品可用无菌量筒量取50mL直接过滤。6.2细菌含量较高的样品，用无菌生理盐水将样品制成一一系列10倍递增的样品稀释液，根据对污染情况的估计，选择适宜的稀释度用于检验。通常采用1：100的稀释液，可得出2/mL～10000/mL的计数范围，若预估计数较高，可用较高稀释倍数的稀释液。制备样品全过程不应超过15min。取50mL样品稀释液过滤。6.3若饮料样液中含有可干扰过滤的较大颗粒物，应经粗滤去除后再过滤。7 测定步骤7.1过滤将灭过菌的滤器连接到抽滤装置上，用无菌镊子夹取滤膜，将其放置在滤器底部，栅格面向上，用滤器配套的夹子固定。无菌移取50mL样液至滤器内，打开滤器阀门和真空泵电源进行抽滤；当全部样液滤过后，加10mL～15mL无菌生理盐水至滤器，重复抽滤步骤；当全部液体通过滤膜后，关闭阀门和真空泵电源，松开夹子，打开滤器，用无菌镊子夹住滤膜边缘部分取出。7.2菌落总数测定7.2.1培养将7.1的滤膜移放到胰化大豆坚固绿琼脂平板（TSAF）上，栅格面向上，滤膜与琼脂应完全贴紧，两者间不得留有气泡。36℃±1℃培养48h土2h。7.2.2计数除去一个菌落很明显地扩散于相邻方格，应按一个阳性方格计算，计数含有一个或更多菌落的所有方格为阳性方格，按式（1)求得每毫升样品中的菌落总数最近似值（MPN）：MPN N X 1ogeEN(N - r)I X D/50...( 1)式中：N一—滤膜上的方格总数;α —阳性方格数;D --稀释倍数。7.3大肠菌群测定7.3.1培养将7.1的滤膜移放到m-FC琼