SBT 10462-2008肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检验方法.pdf

ICS 11. 220B 41SB备案号：24729--2008中华人民共和国国内贸易行业标准SB/T 10462-2008肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌0157：H7 检验方法Method for the examination of entero-hemorrhagic E. coli0157:H7 in meats and meat products2008-07-03 发布2008-12-01实施中华人民共和国商务部发布 SB/T 10462--2008前言本标准是在参考了 SN/T 0973—2000《进出口肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌 O157:H7检验方法》等标准及相关文献资料的基础上，通过试验和验证后制定。本标准的附录 A 是规范性附录。本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。本标准主要起草人：赵志云、金社胜、王丽媛、吴爱华。T SB/T 10462--2008肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌0157:H7检验方法1范围本标准规定了肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌 O157:H7 的检验方法。本标准适用于肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌 O0157:H7 的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 4789.17食品卫生微生物学检验肉与肉制品检验GB/T 4789.28--2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN/T 0973进出口肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌 O157:H7 检验方法3设备和材料3.1刀子、剪刀、镊子、L棒、均质杯等。3.2培养皿:直径 90 mm。3.3吸管：1mL(具有分度值0.01mL)、5mL(具有分度值0.1mL）。3.4移液器及吸头。注：以上实验器材,在试验前应灭菌处理。3.5显微镜:10×～100×。3.6均质器。3.7 冰箱:0℃~4℃。3.8恒温水浴锅:100 ℃,65℃～68 ℃。3.9生化培养箱:36℃±1℃,41℃±1℃。3.10 天平:0～500 g,感量0.1 g。3.11电热干燥箱。3. 12高压灭菌器。4培养基和试剂4. 1改良 E.C新生霉素增菌肉汤 m(EC)n：（配方见第 A.1章)。4.2山梨醇麦康凯平板(SMAC)：（配方见附录第 A.2章）。4.3月桂基磷酸盐胰蛋白陈 MUG肉汤(LST-MUG)：（配方见附录第 A.3 章)。4.4普通琼脂：按GB/T4789.28--2003中4.7规定。4.5半固体培养基：按GB/T4789.28—2003中4.30规定。4.6三糖铁培养基：按GB/T4789.28—2003中4.26、4.27规定。4.7胰蛋白陈肉汤：按GB/T4789.28—2003中3.13规定。4.8MR-VP用培养基、试剂：按 GB/T 4789.28—2003中 3.4规定。 SB/T 10462—20084.9西蒙氏柠檬酸盐培养基：按GB/T4789.28—2003中3.5规定。4.10氨基酸脱羧酶试验培养基（赖氨酸、鸟氨酸）:按 GB/T 4789.28一2003 中 3.12规定。4.11 糖发酵管(棉籽糖、纤维二糖和山梨醇);按 GB/T 4789.28一2003 中 3.2 规定。5抽样抽样数量及操作步骤按GB/T4789.17进行。6 检验程序O157:H7 检验程序见图1。无菌称取样品25g225 mLm(EC)m增菌41℃ 18 h~24 h吸取10-4、10-5、10-°倍稀释液各 0.1 mL涂布于SMAC平板36℃18 h~24 h+非右述的结果捞可疑菌落(中心淡褐色，扁平透明，边缘光滑，直径约2 mm)接种0. 1%.MUG-LST挑取产气、无荧光者，接种普通营养琼脂平板分离培养36℃18h~24 h0157:H7标准TSI 底、斜面＋，HrS一，山血清疑集试验梨醇、纤维二糖一，铵基质十，非右述的各种反应结果或MR十，VP一,柠檬酸-氨酸十，鸟氨酸十，EHEC O157:H7棉籽糖十，有动力乳胶凝集试验非上述的反应结果非肠出血性大肠非肠出血性大肠肠出血性大肠非肠出血性大厨杆菌O157:H7杆菌0157:H7杆菌0157:H7杆菌0157:H7报告图 1肠出血性大肠杆菌 0157 :H7 检验程序2 SB/T 10462—20087操作步骤7.1以无菌方法称取 25 g样品放人装有 225 mL灭菌的m(EC)n 增菌肉汤的均质杯中,8 000 r/min均质2 min,加盖后置生化培养箱中，41℃士1℃培养18