WST 63-1996尿中亚硫基二乙酸气相色谱测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法WS/T 63--1996Urine---Determination of thiodiglycolic acid.--Gas chroniatographic method主题内容与适用范围本标准规定了尿中亚硫基二乙酸（TDGA)的气相色谱测定方法。本法最低检测浓度为0.25mg/L本标准适用于接触氯乙烯的工人尿中亚硫基二乙酸的测定。2原理尿样经酸化后蒸至近干，放冷后用甲醇-乙醚混合液溶解亚硫基二乙酸，将溶剂浓缩后，用重氮甲烷甲酯化，然后进行气相色谱分析，以保留时间定性，峰高定量。3仪器3.1气相色谱仪，火焰光度检测器。3.2微量进样器，10μ。3.3瓷蒸发皿，10mL。3.4刻度离心管，10ml。事先要进行刻度校正，并经硅烷化处理（经1十9二甲基二氯硅烷甲苯液浸泡，取出晾干，再经300C烘烤3h）。3.5分液漏斗，30ml。3.6具支试管（大型气泡采样管外套管）。3.7聚乙烯塑料瓶,100mL。3.8尿比重计。4 试剂本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂4.1实验用水，蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。4.2盐酸，P20=1.19g/mL。4.3盐酸溶液，6mol/L。4.4氢氧化钾溶液，400g/L。4.5甲醇。4.6 乙醚。4.7甲醇-乙醚混合液（2+1)。4.8[固定相：聚乙二醇20M。4.9 担体:Chromosorb W AW DMCS,80~100目。4.10二甲基二氯硅烷甲苯溶液，1十9。1997-05-01实施中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 WS/T 63-- 19964.11业硝基甲脲，制备方法见附录A。4.12亚硫基二乙酸，制备方法见附录B。4.13业硫基乙酸标准液：准确称取50mg亚硫基二乙酸，用甲醇溶解，在50ml容量瓶中用甲醇稀释至刻度。此溶液1mL相当于1mg亚硫基二乙酸，于4（冰箱中至少可使用-个月。临用前用乙醚稀释成1mI相当于10ug亚硫基二乙酸的标准应用液。4.14质控样：用加标模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。5采样、运输和贮存用聚乙烯塑料瓶收集接触氯乙烯的工人班后尿或班前尿样，测比重后按约99+1的比例加入盐酸（4.1)酸化、混匀，于4C冰箱中可保存两周，分析前将尿液彻底混匀。6分析步骤6.1仪器操作条件色谱柱：柱长，2m，内径，3mm，玻璃柱。固定液：担体=5：100。柱温：180℃。载气（纯氮）：50ml/min。燃气（氢气）：60ml./min；助燃气（空气）：70mL/min，氧/氢：0.23。光电倍增管高压：750V。6.2样品处理6.2.1取1mL（或2ml.)尿样于蒸发皿内，加0.1ml.盐酸（4.2），混匀。用蒸汽加热使样品蒸发至湿结晶状态，随即取下放冷至室温。在不断搅拌下或摇动下沿蒸发皿四周加入0.3mL（或0.6mL）甲醇-乙醚混合液（4.6），使内容物溶脱血壁，加入3ml乙醚（4.5）。将上清液移入刻度离心管中，再用少量乙醚（每次2～3mL）洗涤残渣两次，合并醚液，于温水浴中（约45C）浓缩至1mL。6.2.2取约200mg亚硝基甲脲于具支试管中，加0.5~1ml乙醚，试管口处用橡皮塞与分液漏斗[内盛氢氧化钾溶液（4.3）联接，通入样品管的玻璃滴管用硅橡胶管与支管相接。打开分液漏斗活塞，让氢氧化钾溶液徐徐下滴，此时重氮甲烷气体就由支管导入样品管底部，使样品发生重氮化反应，直至醚液变微黄色为止。再放置10min，加入1ml.甲醇（4.4)，细心在温水浴上赶走过剩的重氮甲烷和乙醚，使最后体积在室温下定容为1.0ml。6.3标准曲线的绘制取6支刻度离心管，按下表配制标准管。亚硫基二乙酸标准管的制备02管号134500. 4亚硫基二乙酸标准应用液，ml0. 20. 60. 81. 0乙醚,mL1. 0 0. 60.80. 40. 2 0TDGA含量·μg0246810以下按6.2.2条的分析步骤操作。取2～5ul酯化后的溶液注入色谱仪，测定各管的峰高值。1～5管的峰高值减去零管值后，取其对数为纵坐标，亚硫基二乙酸含量为横坐标，绘制标准曲线。6.4样品测定取按6.2条处理后的2～5μL样品溶液注入色谱仪，测定峰高值，减去标准空白（0管）的峰高值，从标准曲线或回归方程查出或求出样品中亚硫基二乙酸的含量。在测定前后以及每测定10次样品后测-次质控样。色谱图见下图。 WS/T63--1996TDGA8 μgsmin5 min0101非接触者b.加业硫基三乙酸尿尿样色谱图7 计算7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重（1.020)下的浓度校正系数k。1.020-1.000k:尿实测比重1.0007.2按式(2)计算尿中亚硫基二乙酸的浓度。X=m·k/V(2)式中：X-尿中亚硫基二乙酸