SN 1625-2005进出口动物源食品中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1625--2005进出口动物源性食品中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的检测方法Determination of medroxyprogesterone and medroxyprogesterone acetate residuesin animal original food for import and export2005-08-18发布2006-02-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 言本标准的附录 A 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河北出人境检验检疫局起草。本标准主要起草人：郭春海、王凤池、马振栋、陈瑞春。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1625—2005进出口动物源性食品中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的检测方法1 范围本标准规定了动物源性食品中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于兔肉、鱼肉及猪肾中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的检验。2 测定方法2.1方法提要样品中的甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮经乙酸乙酯提取，提取液过C18固相萃取柱，用不同比例的甲醇水淋洗和洗脱，洗脱液吹去甲醇后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩至干,用七氟丁酸酐衍生，吹干定容后，气相色谱-质谱仪选择离子检测，外标法定量。2.2试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。2.2.1 甲羟孕酮标准品，≥98%。2.2.2 醋酸甲羟孕酮标准品,≥97%。2.2.3标准溶液的配制：甲羟孕酮标准储备溶液：准确称取适量的甲羟孕酮标准品（精确至 0.0001g），用丙酮配制成浓度为 0.1 mg/mL标准储备溶液。醋酸甲羟孕酮标准储备溶液：准确称取适量的醋酸甲羟孕酮标准品（精确至 0.000 1 g),用丙酮配制成浓度为0.1 mg/mL标准储备溶液。甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮工作溶液准确移取适当体积的甲羟孕酮标准储备溶液()和醋酸甲羟孕酮标准储备溶液（)，加人乙酸乙酯稀释到一定体积，混匀，备用。2.2.4乙酸乙酯(HPLC级)。2.2.5 甲醇。2.2.6丙酮(重蒸馏)。2.2.7七氟丁酸酐≥98%。无水硫酸钠，650℃灼烧4h，干燥器中放置备用。.9Cis固相萃取柱,500 mg,3mL:依次用5mL甲醇、5mL水、3mL甲醇-水(90+10),3mL甲醇-水(10+90)预处理，备用。甲醇-水溶液（10+90），淋洗用。2. 2. 102.2. 11甲醇-水溶液(90+10),洗脱用。·2.3仪器和设备2.3.1气相色谱-质谱联用仪。2.3.2高速均质器。2.3.3超声波清洗器。2.3.4氮吹仪。2.3.5固相萃取装置。2.3. 6离心机。1 SN/T 1625—20052.3.7具塞玻璃离心管。2.3.8漩涡混合器。2. 4 测定步骤2.4.1提取称取5g(精确至0.01g)样品于50mL具塞离心管中，加人5g无水硫酸钠，拌匀，加人10mL乙酸乙酯,均质 1 min，超声 10 min,2 000 r/min离心5 min,取上清液于20 mL离心管中。每次加人5 mL乙酸乙酯,按上述步骤提取两次，合并提取液于 20 mL离心管中,50℃吹干。2.4.2净化加人1mL的甲醇-水(10+90),50℃加热溶解上述残渣，振荡，一18℃以下冷却5min，2000 r/min离心5 min。小心迅速地将非脂肪层转人 C18固相萃取柱(2.2.9)上，用 1 mL甲醇-水(10+90)洗残渣两次，一18℃以下冷却 5 min,2 000 r/min 离心5 min,非脂肪层小心迅速地转移人柱中。待液面接近柱子上部筛板时,加人1mL甲醇-水(10十90)淋洗柱子,流出液全部弃去。加人1mL甲醇-水(90十10)于上述20 mL离心管中，加热溶解，振荡，一18℃以下冷却5min，取出后2000 r/min离心5min,转人上述 C1g固相萃取柱(2.2.9)中，再加人7mL甲醇-水(90十10),洗脱，收集全部洗脱液。将洗脱液在氮吹仪上 50℃吹至 0.8 mL,补充水至 2 mL,每次用 3mL 乙酸乙酯提取,提取 3次并离心，合并提取液,在氮吹仪上用氮气流于50℃吹干。2.4.3衍生化残渣加人50μL七氟丁酸酐，200μL丙酮,60℃衍生 40min,在氮吹仪上用氮气流于50℃吹干，正已烷定容至 1 mL,GC-MS 分析。2. 4. 4甲孕酮、醋酸甲孕酮衍生物标准溶液准确吸取适用浓度的甲孕酮和醋酸甲羟孕酮混合液()1 mL,用氮气流于 50℃吹干,按照2. 4.3 进行衍生。2. 4. 5 测定2. 4. 5. 1 色谱条件a)色谱柱：弹性石英毛细管柱 DB-5M