SNT 1765-2006动物组织中磺胺类抗生素残留量检测方法 放射免疫受体筛选法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1765-—2006动物组织中磺胺类抗生素残留量检测方法放射免疫受体筛选方法Determination of sulfonamides residues in animal tissues-Radioimmuno receptor screening method2006-04-25发布2006-11-15 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局Hx 相娠醇, 查按码防伪 SN/T 1765—2006前言本标准的附录 A 是规范性附录,附录 B 是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州出入境检验检疫局。本标准主要起草人：秦燕、陈文锐、谢钧宪、张美金、林海丹、林峰、朱柳明。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1765—2006动物组织中磺胺类抗生素残留量检测方法放射免疫受体筛选方法1范围本标准规定了动物组织中磺胺类抗生素残留的放射免疫受体筛选测定方法本标准适用于动物(牛、猪家禽和鱼虾等)组织中磺胺类抗生素残留的放射免疫受体筛选测定。2试样制备和保存2.1试样制备从混合原始样品中取出部分代表性样品，剔除脂肪组织后将可食部分放入搅拌器中绞碎，充分混勾，用四分法缩分出不少于500g，均分两份，装洁净容器内作为试样，加封并标明标记。制样过程中必须防止样品受到微生物或化学物的污染或发生残留物含量的变化。2.2试样保存样品于一18℃冷冻保存。新鲜或冷冻的组织样品可在2℃～6℃贮存72h3测定方法3.1方法提要样品中的磺胺类抗生素残留经提取、稀释后与［HI标记的磺胺二甲基嘧啶相互竟争结合细菌细胞中的磺胺特异性受体。在一定温度下进行竞争性结合反应后，将磺胺-受体复合物的沉淀重新用水溶解，加人闪烁液后测定[H衰变发出的β粒子放射性计数 cpm(count per minute)。液体闪烁计数仪测得的cpm与样品中磺胺残留量成反比。3.2试剂和材料3.2.1水，实验用水为重蒸馏水。3.2.2Charm Ⅱ竞争性受体结合组织磺胺测试试剂盒每批新试剂盒使用前须进行性能监测，见附录A。试剂盒主要由以下部分构成：肉类组织阴性对照浓缩干粉，贮存于2℃～6℃。使用时取浓缩干粉按标签配制成组织阴性对照溶液，此溶液可在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存 48h,或可将全部或部分溶液保存于一15℃以下的冰箱中,使用时将其置于室温下解冻，解冻后的溶液在2℃～6℃冰箱或冰浴中保存24 h。多种抗生素混合标准品干粉，含磺胺二钾基嘧啶，贮存于2℃→6℃。使用时按标签配制成抗生素标准溶液,磺胺二甲基嘧啶浓度为1000 μg/L。溶液的保存方法同。缓冲液：包括肉类组织提取缓冲溶液（MSU提取缓冲液）干粉和调节pH值的M2缓冲液干粉，2℃～6℃贮存。使用时按标签配制成缓冲溶液，在2℃～6℃下可保存2个月。磺胺受体：一18℃保存，应在包装盒所标明的有效期内。磺胺氛标记物²（3H-磺胺二甲基嘧啶=59 μCi/mmol)：一18℃保存。H-磺胺二甲嘧啶的非特异性结合率不应超过H-磺胺二甲嘧啶液体闪烁总计数的20%，否则应更换。1）Charm ⅡI竞争性受体结合组织磺胺测试试剂盒是由Charm公司提供的产品的商品名称。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2）标记药片的同位素放射强度属放射豁免管制范围，对实验室条件无特殊限制要求。1 SN/T 1765—20063.2.3正已烷，分析纯。3.2.4闪烁液。3.3仪器和设备3.3.1液体闪烁计数仪：仪器运行时，环境温度20℃～27℃，相对湿度30%～70%（20℃），仪器使用地点远离其他放射源。3.3.2高速组织捣碎分散匀质器。3.3.3离心机，最大转速为4000 r/min。3.3.4电热恒温器。3.3.5带适配器的硅硼酸盐玻璃试管。3.4测定步骤3.4.1控制液的配制阴性控制液的配制：取2mL组织阴性对照溶液(),加人到6mL MSU提取缓冲溶液()中制成阴性基准液,在室温下混合均匀,该基准液可在室温下放置不超过 6 h。用于分析仪和试剂的性能监测。阳性控制液的配制：取0.3mL抗生素标准溶液（），加6mL组织阴性对照溶液（），混匀后从中取2mL溶液加人到6mLMSU提取缓冲溶液（)中制成阳性基准液，在室温下混合均匀,该基准液可在室温下放置不超过 6 h。用于分析仪性能监测和阳性确认。3.4.2提取称取试样约10g(精确到0.1g)于50mL离心管中，加人30ml.MSU提取缓冲液（）。于高速组织捣碎勾质器中匀质30s～~60s。然后将离心管放置在80℃士2℃的电热恒温器中，保温30min后，将管取出放置在冰水浴中冷却10 min；于33