SN 1059.4-2005进出口食品中大肠杆菌检验方法 谷氨酸脱羧酶法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1059.4—2005进出口食品中大肠杆菌检验方法谷氨酸脱羧酶法Inspection of Escherichia coli in food for import and export-Glutamate decarboxylase assay2005-02-17 发布2005-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局码防伪 SN/T 1059.4-2005目次前言1范围2规范性引用文件3术语和定义4抽样.5测定方法5.1方法原理5.2试剂和材料5.3仪器设备RR5.4#样品制备与保存5.5测定步骤+15.6结果判定和报告附录A（规范性附录)培养基和试剂附录B(资料性附录)相对离心力的计算中业1 g(mL)样品中最近似值(MPN)表附录C(规范性附录) SN/T 1059.4—2005前言本标准的附录 A和附录 C是规范性附录,附录 B是资料性附录。本标准由国家认证认可管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山西出人境检验检疫局。本标准主要起草人：李卫华、付英文、廉慧锋、张建军、巩红霞、宋洁。本标准系首次发布的行业出入境检验检疫标准。 SN/T 1059.4—2005进出口食品中大肠杆菌检验方法谷氨酸脱羧酶法1范围本标准规定了进出口食品中大肠杆菌的抽样和检测方法。本标准适用于进出口冻肉产品、奶及奶制品、速冻蔬菜、脱水蔬菜、水、食醋、非酒精饮料、核桃仁、保健茶等食品中大肠杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标。SN0330出口食品中微生物学检验通则3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1大肠杆菌Escherichia coli又称大肠埃希氏菌，发酵乳糖产酸、产气。吲哚及甲基红（MR)试验阳性，V-P试验阴性，柠檬酸盐利用试验阴性，谷氨酸脱羧酶(GAD)试验阳性。3.2谷氨酸脱羧酶glutamate decarboxylase (GAD)促进谷氨酸脱羧的酶。大肠杆菌能特异性产生这种酶，促进谷氨酸脱羧，产生 -氨基丁酸和CO2。3.3最近似值most possible number(MPN)一种统计学方法，表示95%可信限下的推测值，可用于计量群体中的细菌数目。4抽样按SN0330规定执行。5测定方法5.1方法原理大肠杆菌在酸性环境下产生谷氨酸脱羧酶，这种酶分解GAD反应液中的谷氨酸，产生-氨基丁酸和二氧化碳（区别于肠杆菌科的其他细菌），使反应液pH值发生变化，从而引起反应液中指示剂颜色变化。5.2试剂和材料5.2.1标准菌株阳性菌株：大肠杆菌（Escherichiacoli）阴性菌株：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）。1 SN/T 1059.4—20055.2.2培养基和试剂培养基和试剂见附录 A。5.3仪器设备5.3.1培养箱：35℃±1℃。5.3.2高压灭菌锅:121℃士1℃。5.3.3离心机：500 g(转速计算方法参见附录B)。5.3.4pH计:精度±0.1。5.3.5均质器：8000 r/min。5.3.6 冰箱:0℃～4℃;-18℃以下。5.3.7 移液管:1 mL、5 mL、10 mL。5.3.8 试管:20 mmX200 mm、15 mmX150 mm。5.3.9螺帽离心试管:10 mL。5.3.10发酵管：根据不同样品选择不同型号。5.4样品制备与保存5.4.1样品制备固体或半固体样品：无菌操作称取25g样品，放入装有225mL磷酸缓冲液(PBS)稀释液的灭菌均质杯内，8000 r/min均质1min～2 min(也可用灭菌研钵研磨代替），制成1：10的样品匀液。千粉样品：无菌操作称取25.0g样品，放人装有225mLPBS稀释液和适量玻璃珠的500mL广口瓶（或三角瓶）中，以30cm振幅，7s振荡25次（也可机械振荡30s），制成1：10的样品匀液。液体样品：用灭菌移液管吸取25mL样品（吸取样品时，移液管插人液面下不超过2.5cm，排出液体时不要将移液管插人稀释液中），放人盛有225mLPBS稀释液的500mL广口瓶（或三角瓶）中，按上述方法充分振荡，制成1：10的样品勾液。用1mL移液管确吸取1：10的样品匀液1mL，放入装有9 mL磷酸缓冲液的试管中，按上述方法充分振荡，制成1：100的样品稀释液（操作时注意移液管不要与装有稀释液的容器接触）。按照上述同样的方法依次制成10倍系列稀释液（估计样品的污染程度并决定样品的最高稀释度，应保证接种后最高稀释度所有试管为