SN 1151.6-2004对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1151.6—2004对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程Protocol of dot blot and in situ hybridization for white spot virus2004-11-17 发布2005-04-01实施中华人民共和国发布数码防伤“国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1151.6—2004前言本标准的附录 A为规范性附录。本标推由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国青岛出入境检验检疫局、中国水产科学研究院黄海水产研究所。本标准主要起草人：刘、雷质文、江育林、杨冰、高隆英、史秀杰、黄健。本标准为首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1151.6--2004对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程1范围本标准规定了对虾白斑病毒的核酸探针检测技术一一斑点杂交和原位杂交方法。本标准适用于对虾白斑病毒的检测和鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法3试剂和材料3.1所用水若非注明，应符合 GB/T 6682一1992 中一级水的规格。3.2若非注明,本标准使用确认为分析纯的试剂。3.3DIG标记的核酸探针：按照国家发明专利ZL111336.4(专利权人为中国水产科学研究院黄海水产研究所)的技术提供。3.4SEMP-tris研磨液：按照国家发明专利ZL111336.4（专利权人为中国水产科学研究院黄海水产研究所)的技术提供。3.5 20×SSC:见第 A.1章。3.6 5XSSC:见第 A.2 章。3.7 2XSSC:见第 A.3章。3.8 1XSSC:见第 A.4章。3.90.5XSSC:见第 A.5章。3.10 10XBuffer I:见第 A,6 章。3.11 1XBuffer I:见第 A.7章。3. 12Buffer II(Blocking Buffer):见第 A.8 章。3.1310%十二烷基磺酸钠(SDS)：见第A.9章。3.142× SSC/0.1%SDS:见第 A.10 章。3. 15s0.1× SSC/0.1%SDS:见第 A.11 章。3. 16预杂交液：见第A.12章。3. 1710XBuffer IⅢI:见第 A.13章。3.181XBuffer Ⅱ:见第 A.14 章。3. 19碱性磷酸酶标记的DIG抗体：150 U（200 μI），德国Boehringer Mannheim 公司产品或相当产品。3.2075 mg/mL氮蓝四唑溶液：见第A.15章。3.2150 mg/mL5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸-甲苯胺盐溶液：见第 A.16章。3.22显色液I：见第A.17章。3.23Davidsons AFA固定液:见第 A.18 章。1 SN/T 1151.6—20043.24500μg/mL多聚赖氨酸包被液：见第A.19章。3.2510XTNE:见第A.20章。3.26 1XTNE:见第 A.21 章。3.27蛋白酶K原液：见第A.22章。3.28蛋白酶K工作液：见第 A.23章。3.290.4%甲醛：见第A.24章。3.30杂交缓冲溶液：见第A.25章。3.3120XDenhardts 溶液:见第 A.26 章。3.3225%硫酸葡聚糖溶液：见第A.27章。3.3310mg/mL鱼精DNA溶液：见第A.28章。3.34 10XBuffer V:见第 A.29 章。3.35 1XBuffer IV:见第 A.30 章。3.3610%聚乙烯醇溶液：见第A.31章。3.37显影液Ⅱ：见第A.32章。3.380.5%俾斯麦棕-Y溶液：见第A.33章。3.39核酸探针斑点杂交阳性对照为已知受WSV感染、组织病理学上有明显 WSV 病灶且核酸探针斑点杂交检测呈明显阳性结果的对虾样品组织研磨上清液（一20℃）。3.40核酸探针斑点杂交阴性对照为已知未受WSV感染且核酸探针斑点杂交检测呈明显阴性结果的对虾样品组织研磨上清液（一20℃）。3.41核酸探针原位杂交阳性对照为受WSV感染且组织病理学上有明显 WSV 病灶的对虾样品。3.42核酸探针原位杂交阴性对照为未受WSV感染的对虾样品。4仪器和设备4.1普通冰箱：具冷藏箱。4.2台式离心机：用于1.5mL塑料微量离心管的离心，最高转速可达12000r/min以上。4.3#振荡器：振荡频率40 r/min～220r/min