WST 7-1996产气荚膜梭菌食物中毒诊断标准及处理原则.pdf

中华人民共和国卫生行业标准产气荚膜梭菌食物中毒WS/T7-1996诊断标准及处理原则Diagnostic criteria and principles of managementfor food poisoning of clostridium perfringens1主题内容与适用范围本标准规定了产气英膜梭菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。本标准适用于产气英膜梭菌食物中毒。2引用标准GB4789.13食品卫生微生物学检验产气英膜梭菌检验GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB14938食物中毒诊断标准及技术处理总则3诊断标准3.1流行病特点3.1.1中毒食品多为同批大量加热烹煮后在较高温度下长时间地（数小时）缓慢冷却且不经再加热而直接供餐的肉、鸡、鸭、鱼或其他菜肴及其汤汁。3.1.2中毒多发生于集体用餐者.或广泛散发于进食同一中毒食品的人群中。3.1.3潜伏期一般为8～24h同起中毒常在较短的同一时间内集中发病。除老幼体弱者外，一般预后良好。3.2临床表现：主要症状为腹痛与腹泻。3.3实验室诊断3.3.1采集患者粪便（最好是发病2日以内的）及可疑中毒食品检测产气英膜梭菌，方法按GB4789.13执行。3.3.2分离菌株血清型鉴定，用Hobbs型血清或以分离菌株按一般方法制备的免疫凝集素血清进行凝集试验。3.3.3取同上粪便检样检测产气英膜梭菌肠毒素，见附录A。3.3.4按培养分离菌株检查其肠毒素产生性，见附录B。4判断原则4.1符合本标准流行病学特点及临床表现。4.2实验室诊断能从多数患者的粪便检出产气英膜梭菌肠毒素，或者能从多数患者的粪便与可疑中毒食品检出血清型相同且数量异常多的产肠毒素性产气英膜梭菌。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施 WS/T 7-19965处理原则按GB14938执行。 WS/T71996附录A样品中产气荚膜梭菌肠毒素检验（补充件）A1家兔肠祥试验（标准方法）患者粪便加适量（尽可能少量）生理盐水，充分搅拌，室温放置30min，离心沉淀（4（，10000r/min。20min），取上清液进行试验。准备体重约2kg的健康家兔，术前断食2天（只给饮水），在麻醉下剖腹，结扎回肠每段10～12cm，至多6段，分别注入检样液、阴性对照液（生理盐水）、阳性对照液（产气荚膜梭菌肠毒素）及中和对照（检样液与产气英膜梭菌肠毒素免疫血清混合，室温放置45min）各2mL（中和对照液可增加血清所占容量），复位缝合，18h后开腹测量各试验段的长度（cm）与内液量（mL）。检样及阳性对照肠段的内液量与长度之比值(V/L)大于或等于1.0,而阴性对照及中和对照小于1.0或肉眼观察不到明显反应时，判为阳性结果。A2反向间接血球凝集试验（辅助方法）每克（毫升）检样加生理盐水9mL，充分搅拌后室温静放30min，离心沉淀（4℃，10000r/min，20min），取上清液于微孔板U型孔内以树胶缓冲液【0.5mol/L磷酸盐缓冲水（pH7.2）含吐温800.1%、阿拉伯胶0.01%］或蛋白缓冲液0.15mol/1磷酸盐缓冲盐水（pH7.2)含牛血清白蛋白0.25%进行系列稀释，各孔稀释液0.025mL，加以相同缓冲液稀释的1%致敏血球0.025mL。以检样加非致敏血球为阴性对照，以精制产气英膜梭菌肠毒素加致敏血球为阳性对照。充分摇和后室温静放2h，出现明显凝集者判为阳性结果。若阴性对照孔出现凝集，检样可加等量的10%非致敏血球，充分摇和，室温放置30min，离心沉淀（3000r/min，10min），取上清液按前述方法进行试验。附录B培养分离株检查肠毒素（补充件）B1分离菌株经肉培养基(CM)37C培养24h作为原始菌种。按1%(V/V)接种原始菌种于液体硫乙醇酸钠培养基（FT），保温75℃20min，冷却后37C培养18h（若此培养芽胞形成不多，上述处理及培养可反复1～2次），然后仍按1%（V/V)转种于FT培养基，37℃培养8h，作为产毒种子.按0.5～1.0%（V/V)接种于产芽胞培养基（DS），保温46℃20min，立即转换37℃培养24～30h，培养液经离心沉淀（4℃，10000r/min，20min），上清液按附录A检测肠毒素。3 WS/T 7-1996原始菌株+接种1%（V/V）FT培养基75C保温20min.37C培养18h接种1%（V/V）FT培养基37C培养8h+接种0.5%~1.0%（V/V）DS培养基37C培养24~30h离心沉淀上清液*检测肠毒素产气英膜梭菌肠毒素培养程序B22产气英膜梭菌肠毒素产生试验用培养基B2.1疱肉培养基（CM）：制法见GB4789.28。B2.2液体硫乙醇酸钠培养基（FT）：制法见GB4789.28。B2.3产芽胞培养基(