SN_T 4281-2015国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4281--2015国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法Detection of yellow fever virus on ports-superparamagneticimmunochromatography2016-01-01实施2015-05-26 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局i06982:刮涂厚空真 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法SN/T 4281—2015*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045)总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷广印刷*开本880×12301/16　印张0.5　字数10千字2016年1月第一版2016年1月第一次印刷印数 1—1100*书号：155066·2-29515 SN/T 4281--2015前言本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院本标准主要起草人：史蕾、顾大勇、刘春晓、马岚、徐云庆、赵纯中、何建安1 SN/T 4281—2015国境口岸黄热病毒超顺磁免疫层析检测方法1范围本标准规定了超顺磁免疫层析检测方法用于国境口岸快速筛查黄热病毒抗原的检验对象、方法和结果判定本标准适用于国境口岸发现的可疑粉末和不明液体携带黄热病毒的实验室快速检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1552国境口岸生物因子恐怖事件监测规程WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1黄热病毒yellow fever virus黄热病毒（yellow fever virus）属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），为单股正链RNA病毒。病毒为球形，直径40 nm～50 nm,包膜表面有细小但明显的突起。该病毒具有三个结构蛋白包括C蛋白（衣壳蛋白）、M蛋白（膜蛋白）和E蛋白（包膜蛋白），其中E蛋白是病毒表面的主要成分，参与血凝抑制与受体细胞的识别和结合。3.2免疫层析法immunochromatographic test利用微孔膜的毛细管作用，通过液体样品在层析介质中的移动，检测特异性抗原或抗体存在的免疫学方法。3.3超顺磁免疫层析 superparamagnetic immunochromatography;SMICT种采用超顺磁材料作为标记物的新型免疫层析方法。该方法是一种综合了纳米超顺磁技术、免疫层析技术及磁定量检测技术的新型免疫检测方法4生物安全防护要求4.1检测前做好个人防护，防护方法和标准见SN/T1552。4.2实验室应遵循GB19489和WS233对生物安全2级（BSI-2)实验室的生物安全要求。4.3使用过的实验用品应遵照GB19489的要求，对废弃物的处理要求进行无害化处理。1 SN/T 4281---20155 检验对象本标准用于检测国境口岸发现的疑似黄热病样品，包括：一可疑粉末样品；一不明液体样品。6　主要设备和试剂主要设备：台式离心机、微量移液器、磁性免疫色谱分析系统（使用美国MagnaBioSciences的Maginetic Assay Reader，MAR磁性免疫色谱分析系统）’。7样品制备7.1样品采集样品采集方法按照SN/T1552进行。7.2样品制备7.2.1可疑粉末样品：分多点取可疑粉末，加适量生理盐水或缓冲液（参见附录A中的A.1、A.2)适量混匀，使内容物浸出，12000g离心5min或自然沉降20min后，取上清作为待检样品。7.2.2不明液态样品：直接吸取可疑液体100μL作为待检样品，如样品不足则加生理盐水或缓冲液补足。7.2.3为提高检出率，样品制备时应尽量用小体积液体溶解使用。8检验方法8.1操作步骤8.1.1检测前先将待检测样品和反应缓冲液（参见附录A中的A.1)恢复室温。8.1.2打开铝箔袋，将检测卡取出，检查检测卡是否完好，若有破损或弯曲请勿使用，将检测卡加样孔朝外平放在实验台面上。8.1.3使用微量移液器吸取100μL待测样品，垂直缓慢滴人黄热病毒超顺磁检测卡的加液口前端小孔，随即沿加液口后端小孔垂直缓慢滴人50 μL反应缓冲液。8.1.4室温放置20 min，用磁性免疫色谱分析系统进行测试。8.1.5将检测卡插入磁性免疫色谱分析系统中，启动“开始”按钮，读取样品