SC_T 3049-2015刺参及其制品中海参多糖的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.120.30X 20SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 3049—2015刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法Determination of sea cucumber polysaccharides in Apostichopus japonicus andinterrelated products-High performance liquid chromatography2015-02-09 发布2015-05-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 3049--2015前言本标准按照GB/T 1.1--2009给出的规则起草。本标准由农业部渔业渔政管理局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会（SAC/TC156/SC3)归口。本标准起草单位：中国海洋大学、大连獐子岛渔业集团股份有限公司、山东东方海洋科技股份有限公司、中国水产科学院黄海水产研究所。本标准主要起草人：薛长湖、薛勇、刘小芳、常耀光、黄万成、刘云涛、王联珠1I SC/T 3049--2015刺参及其制品中海参多糖的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了刺参（Apostichopus japonicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参、即食刺参、胶囊、浆液等深加工品中海参多糖含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于刺参（Apostichopus japomicus）及以刺参为原料加工而成的干刺参、即食刺参、胶囊、浆液等深加工品中海参多糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T3016水产品抽样方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1海参多糖 sea cucumber polysaccharides由海参岩藻聚糖硫酸酯和海参硫酸软骨素组成。海参岩藻聚糖硫酸酯是一类由 L-岩藻糖聚合形成的直链硫酸化多糖;海参硫酸软骨素是一类具有岩藻糖支链取代的硫酸化多糖，主要由D-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-岩藻糖构成。4原理样品经酶解、乙酸钾沉淀、酸解后制备得到海参硫酸软骨素水解液，水解液中岩藻糖与1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生反应，XDB-C18色谱柱分离，经配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定岩藻糖衍生物的含量，内标法定量，以岩藻糖含量为基准计算出样品中海参多糖的含量。5 试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂。5.1试验用水应符合 GB/T 6682一级水的要求。5.2标准物质：L-岩藻糖(Fuc),纯度≥99%。5.3内标物：乳糖(Lac),纯度≥99%。5.4甲醇:色谱纯。5.5乙腈：色谱纯。5.6 三氯甲烷。5.7 冰乙酸。5.8盐酸。5.9 三氟乙酸。5.10木瓜蛋白酶：食品级。1 SC/T 3049-—20155.11 乙酸钠。5.12乙二胺四乙酸。5.13半胱氨酸盐酸盐。5.14 乙酸钾。5.15氢氧化钠。5.16 磷酸二氢钾。5.17 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)。5.180.1mol/L乙酸钠缓冲液：准确称取8.20g无水乙酸钠，用水溶解并定容至1000mL.用冰乙酸调节 pH至 5.9～6.1。5.194mol/L三氟乙酸溶液：准确移取 30mL三氟乙酸，用水稀释至100 mL。5.200.3mol/L氢氧化钠溶液：准确称取1.20g氢氧化钠.用水溶解并稀释至100mL。5.210.3mol/L盐酸溶液：准确移取2.5mL.盐酸，用水稀释至100ml。5.220.5mol/L1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮-甲醇溶液：准确称取174mg重结晶的1-苯基-3-甲基5-吡唑啉酮,用 2 mL甲醇溶解。5.23岩藻糖标准储备液：准确称取经真空干燥至恒重的L-岩藻糖（5.2)164mg，用水溶解并稀释至100mL。该溶液浓度为10mmol/L，4℃密封避光存放，有效期15d。5.24岩藻糖标准工作液：准确移取适量岩藻糖标准储备液（5.23），用水稀释成浓度为0.10mmol/L、0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、0.75 mmol/L、1.00 mmoi/L、1.25 mmol/I的岩藻糖系列标准工作液，当天配制。5.25内标工作液：准确称取经真空干燥至恒重的乳糖(5.3)68mg，用水溶解并稀释至100mL。该溶液浓度为2mmol/L，4℃密封避光存放，有效期15d。5.260.05mol/L磷酸盐缓冲液：准确称取6.80g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml，用0.3mol/L氢氧化钠溶液(5.20)调节 pH至 6.8～7.0。使用前,用0.45 μ