DB37_T 2276-2013辣椒疫霉病诊断及检测技术标准.pdf

ICS 65. 020B 16DB37山長东省地電方标准DB 37/T 2276—2013辣椒疫霉病诊断及检测技术标准The standard for diagnosis and detection of pepper phytophthora blight2013-04-01发布2013-0501实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由山东省农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：张修国、李壮、马建。I DB37/T 2276—2013辣椒疫霉病诊断及检测技术标准1范围本标准规定了辣椒疫毒病诊断及检测技术。本标准适用于辣椒疫毒病不同生育期症状描述，病菌分离培养及保存技术，病菌形态学描述，致病性测定技术，病害流行与气候因子关系分析，病菌分子检测技术。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1辣疫莓病Pepper phytophthorablight由辣椒疫莓菌（PhytophthoracapsiciLeonian），其无性繁殖产生孢子囊和游动孢子引起的病害，主要为害叶片和果实，病叶病斑圆形或近圆形，边缘黄绿色中央暗褐色，果实发病形成暗绿色圆形凹陷的水渍状病斑，后扩展使全果皱缩软腐，潮湿时表面有白色霉层状。2. 2病状symptom of a disease辣椒病部所显示的异常特性，如叶片病班、变软及腐烂等。2. 3病征symptom of a disease辣椒病部病部出现病菌子实体，如疫霉菌灰白色霉层等2. 4接种体inoculum用于接种引起辣椒疫毒病发生的病原物或病原物的一部分。2. 5接种悬浮液inoculum suspension用于辣椒疫毒病接种含有定量接种体的液体。2. 6人工接种中artificial inoculation在适宜条件下，通过人工操作将病菌接种体置于辣龈适当部位并使之发病的过程。1 DB37/T 2276—20132. 7致病性pathogenicity病原物所具有的破坏辣椒和引起植物发生病变的能力。2. 8病情级别disease rating病情指数（缩写为DI）又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数（DI）是根据一定数目的植株或植株器官各病级（把植株或植株某一器官感染病害轻重程度划分为等级称为病级)核计其发病株（器官）数所得平均发病程度的数值。3辣椒疫霉病病状与病征见附录A。4辣概疫毒病病菌诊断辣椒疫霉病病菌特征见附求A。5辣椒疫毒病菌鉴定与致病性测定5.1菌株分离与形态观察采集典型辣椒疫病病叶，用接种针挑取疫霉菌丝，获得分离物，或利用酒精升汞消毒法，分离获得菌株：用0.05%升汞落液没泡1.5min，后用无菌水冲洗2～3次，置于0MA或V8培养基25C下培养，获得辣疫毒菌株，制备玻片，规察孢囊梗和孢子囊的形态特征，形态学鉴定为Phytophthoracapsici，直接用于接种备用。5.2病叶检查检查辣椒叶片、果实有无疫霉病可疑症状，叶片有无灰白色霉状物或霉层。5.3病原菌检测5.3.1直接检测辣椒用挑针挑取病斑上霉状物制片镜检，显微镜观察有无病菌孢囊梗和孢子囊，描述、记录孢囊梗和孢子囊形态特征，必要时测量孢囊梗和孢子囊的大小（见附求A）。5.3.2保湿检验将未发现辣椒疫毒菌的可疑辣椒叶片和病果，置于大小为50×90cm的瓷盘中，铺一层灭菌纱布，加无菌水侵透纱布，放置可疑辣椒叶片，用塑料膜密封，放置于25℃培养箱内培养，间隔24h用挑针挑取病斑上毒状物制片镜检，显微镜观紧有无病菌孢囊梗和孢子囊，描述、记永孢囊梗和孢子囊形态特征，必要时测量孢囊梗和孢子囊的大小，至少检查15个可疑辣椒叶片。2 DB37/T 2276—20135.4致病性测定5.4.1接种体制备辣椒疫霉菌株先于0MA或V8平板培养基上充分培养（见附件B)，制备大量菌丝物，滤去V8培养基加无菌水冲洗两次，间隔12h，然后再加适量无菌水于4℃下诱导处理20分钟，然后25℃下培养30分钟，镜检观紧游动孢子产生，加适量无菌水稀释至适宜浓度，血球记数板检测游动孢子浓度，调至5×10°个/ml，接种备用。5.4.2接种期和接种浓度辣椒疫霉病接种期为2～3叶期，接种浓度约5×10个游动孢子/mL.5.4.3接种方法5.4.3.1辣椒叶片点接法：用移液枪点接5×10°个游动孢子/mL游动孢子悬浮液于辣椒子叶叶片正面中部，每子叶1滴，10μL/滴。5.4.3.2辣椒叶片喷雾法：用喉头喷雾器将5×10°个游动孢子/mL悬浮液均勺喷施于叶片表面。5.4.3.3灌根接种法：接种前浇透水，取2mL接种悬浮液加到植株根部周围，注意不要使菌液直接