DB37T 577-2005饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定 分光光度法.pdf

ICS 65.120B20DB37山东省地電方标准DB37/T 5772005饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定分光光度法Determination of feed additive6-phytase activity-Spectrothotometric method2005-××-××发布2006-03-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T5772005前 言附录A、附录B为资料性附录。本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出。本标准负责起草单位：山东省饲料监察所。参加起草单位：济南天天香饲料有限公司。本标准主要起草人：李俊玲、孙延军、郭芳坤、韩冰、战余铭、门晓东， DB37/T 577—2005饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定分光光度法1范围本标准规定了以分光光度法测定饲科添加剂6位点植酸酵活性的方法。本标准适用于作为饲料添加剂使用的6位点植酸酵产品，2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。3定义6位点植酸酵活性单位：样品在植酸钠浓度为5.0mmo1/L、温度37C、pH值5.00的条件下，每分钟从植酸钠中释放1o1无机磷，即为一个植酸酵活性单位，以U表示。方法原理6位点植酸酵在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠，生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性溶液中，与钒钼酸铵反应生成黄色的[(NH）,PO,NH,VO-16Mo0.]复合物，在波长415nm下进行比色测定。试剂和溶液本标准中所用试剂，均为分析纯试剂，水为符合GB／T6682中规定的三级水。所用器皿洗涤不要用含磷清洗剂。5.1硝酸。5.2氨水5.3冰醋酸。5. 4 Tritonx100.5.5肌醇六磷酸钠(CHe0sPNai)。5. 6钼酸铵[(NH,) 6Mo,0 · 4H,0] ,5.7三水乙酸钠。5.8偏钒酸铵(NH,VO.)5.9牛血L清蛋白（BSA）5.10磷酸二氢钾(KH:PO)：基准试剂5.11乙酸缓冲液（I），0.25mo1/L：称取34.02g三水乙酸钠（5.7）于1000ml容量瓶中，加入900ml水溶解，用冰醋酸（5.3）调节pH至5.00士0.01，并用蒸馏水定容至1000mL。室温下有效期2个月5.12乙酸缓冲液（II），0.25mol/L:称取34.02g三水乙酸钠（5.7）、0.5gTritonX100（5.4）、0.5g土0.01，并用蒸馈水定容至1000mL，室温下有效期2个月。N DB37/T577—20055.13植酸钠落液，7.5mmo1/L：称取0.6929g肌醇六磷酸钠(C,H0P,Na=）（5.5）于100mL容量瓶中，用0.25mo1/L乙酸缓冲液(5.11)落解并定容至度.用冰醋酸（5.3）调节pH至5.00土0.01，现用现配。5.14硝酸溶液：1+2水溶液。5.15钼酸铵溶液，100g/L：称取10g钼酸铵［(NH,）6Mo.0·4H,0]（5.6）于100mL容量瓶中，加入1.0mL氨水（5.2），用水溶解并定容至刻度。5.16偏钒酸铵溶波，2.35g/L：称取0.235g偏钒酸铵(NHV0）（5.8）于100mL棕色容量瓶中，加入2mL硝酸落液(5.14)，用水落解定容至刻度，避光条件下保存，一周内有效。5.17颜色终止液：移取2份硝酸溶液(5.14)，1份钼酸铵溶液(5.15)，1份偏钒酸铵溶液(5.16)混合后使用，现用现配。5.18磷标准液：准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准磷酸二氢钾(5.10)于100mlL容量瓶中，用乙酸缓冲液(5.12)溶解，并定容至100mL。此浓度为50.0μmol/mL。6仪器设备6.1F电子天平：感量0.1ng。6.2恒温水浴：37℃±0.1℃。6.3分光光度计：附10mm比色Ⅲl。6.4磁力拌器。6.5淡涡混合器。6.6酸度计：精度士0.01pH.6. 7离心机：转速为4000r/min以上。6.8温度计：精度为±0.1℃，最大量程50℃7试样制备取有代表性样品，用四分法将试样缩分至200g左右，装入密封容器。8测定步薪8.1标准系列的制备：吸取磷标准液（5.18）0.5ml，用乙酸缓冲液（5.12)分别稀释至1.0、2.0、4.0、8.0、16.0ml，混匀，上述标准工作液的浓度分别为25.0、12.5、6.25、3.125、1.562μmo1/mL。8.2试样溶液的制备参照附录A中建议的称样量称取试样两份，精确至0.1mg，置于100mL烧杯中，如入约70mL乙酸缓冲液(5.12)，在磁力揽拌器（6.