药品微生物限度检查法.pptVIP

注意事项 配制MUG培养基时，务必校正pH值 ，灭菌后pH不得过7.4否则pH值偏高，MUG分解本身则显荧光。 供试品培养液接种于MUG培养基中，培养时间一般在4h、24h观察是否产生荧光，如荧光很微弱，不能准确判断时，可延长培养时间至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的GUD的活性不完全相同，对底物和底物的浓度反应的差异；培养基中选择因子的影响；培养时间、温度；pH的改变；大量竞争菌和样品本身物质成分的干扰等，对结果的判断亦有影响。 * * 第三十页，共四十八页，2022年，8月28日 注意事项 观察供试品MUG管时，可与阳性对照管、阴性对照管同时在366nm紫外灯下观察。 在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上生长的可疑菌落，务必挑选2-3个以上菌落分别做IMViC试验鉴别。 在IMViC试验中，以灭菌接种环沾取菌苔，首先接种于枸椽酸盐琼脂斜面上，然后再接种于蛋白胨水等其它培养基上，切务将培养基带入枸椽酸盐琼脂斜面上，以免产生假阳性结果。 * * 第三十一页，共四十八页，2022年，8月28日 大肠菌群 大肠菌群作为水质粪便污染的指示菌已有80多年历史。大肠菌群的定义：是指37℃生长时能发酵乳糖，在24h内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，符合上述定义的细菌除大肠埃希氏杆菌属外，还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属等，实际上基本包括人和了正常家畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌，较大肠埃希菌更具代表性，且存活时间较长。故检出大肠埃希菌，一般认为药品受粪便的近期污染；而检出大肠菌群，则表示药品受粪便的近期或远期污染。以大肠菌群作为口服药品微生物限度标准的控制菌，具有广泛的卫生学意义，更能反映药品的卫生质量。 * * 第三十二页，共四十八页，2022年，8月28日 操作方法 取乳糖胆盐发酵管3支，分别加入1:10供试液1ml (供试品量0.1g或0.1ml), 1:100供试液1ml(供试品量0.01g或0.01ml),1:1000供试液1ml（供试品量0.001g或0.001ml），同时作阴性对照，各管置36±1℃培养18-24h, 阴性对照应无菌生长。 * * 第三十三页，共四十八页，2022年，8月28日 结果判断 乳糖胆盐发酵管若无菌生长，或有菌生长但不产酸产气（或产酸不产气）→报告 未检出大肠菌群；如有产酸产气，应做确证试验，将产酸产气的发酵管划线接种于EMB或麦康凯琼脂平板上培养18-24h，如平板上无菌落生长可判该管未检出大肠菌群。如平板上有菌落生长并与药典所列的菌落形态特征相符或疑似，镜检为革兰阴性无芽孢杆菌的菌落，应取上述平板上的可疑菌落4-5个各接种1支乳糖发酵管，培养24－48h,凡产酸产气，革兰阴性无芽孢杆菌，判该管检出大肠菌群，反之判该管未检出大肠菌群。 * * 第三十四页，共四十八页，2022年，8月28日 lb-04-12-24 lb-04-12-24 药品微生物限度检查法 第一页，共四十八页，2022年，8月28日 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法，也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。检查项目包括染菌量及控制菌检查。 * * 第二页，共四十八页，2022年，8月28日 微生物限度检查法起草的指导思想 较完善检查法：也是目前国际上常用的一种方法。是以琼脂平板上的细菌、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌、霉菌和酵母菌的菌落数。 增加试验的可操作性 使方法更具科学性，保证检验结果的准确性。 * * 第三页，共四十八页，2022年，8月28日 检验全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净度10000级和局部洁净度100级单向流空气区域内进行，以防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按中华人民共和国国家标准GB/T 16292～16294-1996 《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度验证。 操作环境 * * 第四页，共四十八页，2022年，8月28日 洁净级别 洁净级别 尘粒数/m3 浮游菌个/m2 沉降菌个/0.5h 微粒直径 ≥0.5um 微粒直径 ≥5um 100 ≤3,500 ≤0 ≤5 ≤1 10000 ≤350,000 ≤2000 ≤100 ≤3 100000 ≤3,500,000 ≤20,000 ≤500 ≤10 * * 第五页，共四十八页，2022年，8月28日 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或 cm2） 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。 除另有规定外，一般供试品的