单克隆抗体的制备和应用.pptVIP

当前第30页\共有59页\编于星期五\18点 杂交瘤细胞的克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。 克隆化—即把培养孔中的细胞从单个细胞进行培养繁殖，使之成为单克隆，其分泌的抗体达到均一性。 当前第31页\共有59页\编于星期五\18点 有限稀释法 当前第32页\共有59页\编于星期五\18点 软琼脂培养法 以适当浓度杂交瘤细胞加入软琼脂培养 基中，形成由一个细胞增殖而成的细胞集落。 当前第33页\共有59页\编于星期五\18点 杂交瘤细胞的克隆化筛选： 当前第34页\共有59页\编于星期五\18点 免疫球蛋白类别及亚类的鉴定 七、单克隆抗体的鉴定 小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合形 成的杂交瘤细胞，其分泌的特异性McAb的本 质仍是小鼠的不同类型及其亚类的免疫球蛋白 （Ig），其中以IgG（IgG1、 IgG2a、IgG2b和IgG3等亚类）最常見，其次为IgM。 当前第35页\共有59页\编于星期五\18点 抗体亲和力是指抗体与抗原或半抗原结合的强度，其高低主要是由抗体分子结合表位部位和抗原决定簇之间的互补程度决定。 特异性 是否与其他抗原有交叉反应 敏感性 对腹水和培养上清进行效价测定 亲和力测定 当前第36页\共有59页\编于星期五\18点 八、单克隆抗体的制备 动物体内诱生法 取Balb/c小鼠, 首先腹 腔注射0.5ml液体石腊或 降植烷进行预处理。 1~2周后, 腹腔内接种杂交 瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠 腹腔内增殖，并产生和分泌 单克隆抗体 当前第37页\共有59页\编于星期五\18点 约1~2周, 可见小鼠 腹部膨大。用注射器 抽取腹水，即可获得 大量单克隆抗体。 当前第38页\共有59页\编于星期五\18点 将杂交瘤细胞置于培养瓶（或灌）中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体。收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体，不含无关Ig，但成本髙。 体外培养法 当前第39页\共有59页\编于星期五\18点 我国单克隆抗体的发展历史和前景 早期研究阶段 全军单克隆抗体研究协作组（单克隆抗体通迅） 应用和市场化 HLDA HCDM 功能基因组研究中的重要地位 国家重大科技项目（973、863等）主要研究 内容之一 当前第40页\共有59页\编于星期五\18点 单克隆抗体的应用 基础理论研究（生命科学） 发病机理的研究 疾病的预防（紧急预防） 疾病的诊断（传染性疾病、肿瘤、自身免疫 性疾病、过敏性疾病、免疫缺陷病） 疾病的治疗（治疗性抗体） —— 一项重要的生物技术和 一类生物高科技产品 当前第41页\共有59页\编于星期五\18点 单克隆抗体在生命科学和医学中的广泛应用 从医学到生命科学的各个领域 从基础研究到临床应用 从诊断到预防和治疗 MHC 细胞表面分子 血型 肿瘤相关抗原和分子 抗Ig的同种异型 激素、细胞因子和血浆成分 纯化干扰素 病原生物 当前第42页\共有59页\编于星期五\18点 传染性疾病 HIV: 急性感染期和晚期: 核心抗原p24升高; 检测抗HIV抗体初筛; 免疫印迹进一步确认; CD4+T 细胞200/?l病情严重 HAV、HBV、HCV: 抗体 HFRS: 免疫荧光，ELISA（特异性IgM） 肿瘤 多种肿瘤的标志物 直肠结肠癌:CEA 前列腺癌:PSA 原发性肝癌:AFP 淋巴瘤和白血病:CD分子 自身免疫性和过敏性疾病 自身抗体（抗核抗体、类风湿因子） 放射免疫测定法（RIA）检测特异性IgE 甲状腺素、胰岛素、生长激素 其他 血型检测：凝集反应（直接和间接） 早孕: 人绒毛膜促性腺激素（hCG） 男性不育: 抗精子抗体 单克隆抗体在临床诊断中应用 当前第4