实用电子显微镜技术.pptxVIP

实用电子显微镜技术;第一节 电子显微镜发展简史;制造者 ; 电子显微镜之父 E.Ruska 世界上第一台电子显微镜;仪器名称：透射电子显微镜 生产厂家：荷兰Philips公司 仪器型号：Tecnai 12 主要附件： Gatan 792 CCD 性能指标： 最大放大倍数：65万倍点分辨率： 0.24nm 线分辨率： 0.14nm 最高加速电压： 120KV;一、国外电子显微镜生产简况 1932年德国物理学家Knoll和Ruska研制成功第一台透射电子显微镜。 20世纪80年代末，商品透射电子显微镜普遍进入市场。 电镜厂家：日本日立（Hitachi）公司 日本电子光学实验室（JEOL) 荷兰菲利浦公司（Philips）（即美国FEI公司） 德国蔡司（Zeiss）公司 捷克 英国剑桥;二、国内电子显微镜生产简况 1959中国科学院长春光学精密机械与物理研究所研制成功第一台透射电子显微镜 10万倍 100kv 重大科学技术成果 1975中国科学院北京科学仪器厂研制成功第一台扫描电子显微镜 电镜厂家：中国科学院北京科学仪器厂研制中心 上海电子光学技术研究所 南京光学仪器厂 三、电子显微镜的发展 分辨率进一步提高，点分辨率优于0.3nm，晶格分辨率0.1-0.2nm 放大倍数从十几倍提高到几十万甚至百万倍 种类不断增加，功能不断扩展。（TEM、SEM、STEM、分析电子显微镜、高压透射电子显微镜、低温透射电子显微镜等） 计算机技术开始用于电子显微镜 ;一、电子显微镜技术的发展 第一台电子显微镜问世后，面临的首要问题是如何将电子显微镜技术应用于生物学及其他学科研究。 电子显微镜结构的改进和功能的改善，样品制备技术的改进，使电子显微镜技术在生命科学研究中发挥了重要作用。;表1-2 电子显微镜技术发展简史 ;二、电子显微镜技术的应用;扫描隧道显微技术(STM) 原子力显微技术(AFM) 激光扫描共焦显微技术;扫描隧道显微技术(STM) 原子力显微技术(AFM) 激光扫描共焦显微技术;扫描隧道显微技术(STM) 原子力显微技术(AFM) 激光扫描共焦显微技术;扫描隧道显微技术(STM) 原子力显微技术(AFM) 激光扫描共焦显微技术;第一章 超薄切片技术 透射电镜的生物样品制备的常用方法包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。透射电镜靠电子束穿透样品成像，对样品厚度有很高要求。超薄切片方法得到的样品切片厚度为60-100nm，冷冻复型膜厚度约为30nm。复型膜制备和样品负染色的实验过程简单、易于操作，而制备超薄切片的过程则比较繁杂。它分为普通超薄切片技术和冷冻超薄切片技术两大类。;第一节 普通超薄切片技术;对超薄切片的基本要求 为了获得清晰的电镜图像，超薄切片应达到以下几点要求： （1）细胞的超微结构得到良好的保存，没有人工假象； （2）切片厚度一般为50-70nm左右，较薄的切片分辨率较高，但反差较弱，而较厚的切片反差虽好，但分辨率则稍差； （3）切片的包埋介质不变形、不分解、不升华，可耐受电子束的照射； （4）切片平展均匀，没有刀痕、皱褶、震颤及染色剂的沉淀污染； （5）切片染色后，具有良好的反差并可获得清晰的图像;第二节 制样前的准备工作;一、实验设计的准备;二 实验器具和实验试剂的准备;第三节 取材与固定;“快”：不管是从麻醉或处死动物身上取材，还是临床手术取材，都应注意保持样品的微细结构，使其最大限度的近于生活状态。一定要目标明确，操作迅速，而且使样品必须在离体半分钟或最多2分钟内浸入固定液，以免时间过长，出现细胞自溶。尤其在暑热情况下，还会出现微生物繁殖导致样品腐败，细胞的精细结构当然会全部破坏。 “准”：取材的部位一定要准确可靠，同时还应注意材料的方向性，例如选取肌组织时，就要考虑肌原纤维在将来切片时是纵断还是横断；其它组织当然也要考虑到定位和定向的问题。 “轻”：所谓“轻”，是指一切操作都应始终贯彻动作轻柔，不仅要避免对组织的挤压及钳拉，还要注意器械的锋利，否则将引起组织结构的人工损伤性变化。 “小”：固定液的穿透能力都比较弱，所以为了保持样品近于生活状态的微细结构，取材大小当然要