CJ 3018.15-1993  生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 多管发酵法.docx

293 中华人民共和国城镇建设行业标准 生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 CJ/T 3018.15—1993 多管发酵法 Leachate—Detection for members of the coliform group—Multiple-tube fermentation method 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用多管发酵法检测渗沥水中总大肠菌群的方法。 本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。 2 引用标准 GB 5750 生活饮用水标准检验法 总大肠菌群 GB 4789.3 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定 3 术语 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h 内产酸、产气的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。 总大肠菌群数系以每升渗沥水样品内，总大肠菌群的最可能数(MPN) 表示。 4 原理 根据总大肠菌群具有的生物特征，如革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃于乳糖内培养能发酵，并在 24h 内产酸、产气的特点，将不同稀释度的试样接种到具有选择性的乳糖培养基中，经培养后根据阳性 反应结果，测出原试样中总大肠菌群的MPN 值。 5 培养基和试剂 本标准所用试剂，除另有说明外，均为符合国家标准或行业标准的化学纯试剂和生化试剂，均用蒸 馏水或去离子水。 5.1 乳糖蛋白胨培养液 5.1.1 成份：蛋白胨 牛肉膏 乳糖 氯化钠 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 蒸馏水 10g 3 g 5g 5g 1 mL 1000 mL 5:1.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000mL 蒸馏水中加热溶解，调整pH 为7.2～7.4,再加入 中华人民共和国建设部1993-05-03批准 1993-09-01 实施 CJ/T 3018. 15- 1993 294 1mL1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭 菌20 min,贮存于冷暗处备用。 5.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 按上述乳糖蛋白胨培养液(5.1)浓缩三倍配制。 5.3 品红亚硫酸钠培养基 5.3.1 成份：蛋白胨 10 g 乳 糖 10 g 磷酸氢二钾 3.5 g 琼 脂 15～30 g 蒸馏水 1000 mL 无水亚硫酸钠 ～5g 5%碱性品红乙醇溶液 20 mL 5.3.2 储备培养基的制备 先将琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使其溶解。再用蒸 馏水补足到1000mL, 调整pH 为7.2～7.4,趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装 于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。 5.3.3 平板培养基的配制 将上法制备的储备培养基(5.3.2)加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一 定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌 空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10 min 以灭菌。 用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡粉红色为止。 将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基内，并充分混匀(防止产生气泡),立即 将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基 于冰箱内保存应小于两星期，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。 5.4 伊红美蓝培养基 5.4.1 成分：蛋白胨 10 g 乳糖 10 g 磷酸氢二钾 2 g 琼脂 20～30g 蒸馏水 1000 mL 2%伊红水溶液 20 mL 0.5%美蓝水溶液 13 mL 5.4.2 储备培养基的制备