CJ 3018.14-1993  生活垃圾渗沥水 细菌总数的检测 平板菌落计数法.docx

290 中 华 人 民 共 和 国 城 镇 建 设 行 业 标 准 生活垃圾渗沥水 细菌总数的检测 CJ/T 3018.14—1993 平板菌落计数法 Leachate—Detection of total bacterial number —plate count for bacterial colonies 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用平板菌落计数法测定渗沥水的细菌总数。 本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。 2 引用标准 GB 5750 生活饮用水标准检验法 细菌总数 GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌数总数测定 3 术语 细菌总数是指1 mL 渗沥水试样在一定条件下培养后所生长的细菌菌落的总数。 4 原理 每种细菌都有其一定的生理特性，应用不同的营养物质及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、 需 氧性质等)去满足它，才能分别地将各种细菌培养出来。在实际工作中， 一般都只用一种方法(即在营养 琼脂培养基中，于37℃经24h 培养)进行细菌总数的测定，因此，所得结果只包括一群能在营养琼脂上 发育的嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。 5 培养基和试剂 本标准所用试剂，除另有说明外，均为符合国家标准或行业标准的化学纯试剂和生化试剂，均为蒸 馏水或去离子水。 5.1 无水乙醇(C?H?OH)。 5.2 氢氧化钠(NaOH),15%(m/m) 溶液 将15g 氢氧化钠(NaOH), 溶于100mL 水中。 5.3 营养琼脂 5.3.1 成份：蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼 脂 蒸馏水 10 g 3g 5 g 10～20 g 1000 mL 5.3.2 制法 中华人民共和国建设部1993-05-03批准 1993-09-01 实施 CJ/T 3018. 14— 1993 291 将上述成份混合后，加热溶解，滴加氢氧化钠溶液(5.2)调整pH 为7.4～7.6,用漏斗分装约15mL 于玻璃试管(6.8),在121℃高压灭菌20 min。 冷却后贮存在冷暗干燥处备用。 5.4 生理盐水 将(8.50～9.50)g 氯化钠(NaCl) 溶于水中，稀释成1000mL, 摇匀。 pH 值应为4.5～7.0。 6 仪器、设备 6.1 高压蒸汽灭菌器 6.2 干燥箱：最高工作温度300℃。 6.3 恒温培养箱：(36±1)℃。 6.4 冰箱。 6.5 恒温水浴：(46±1)℃。 6.6 放大镜。 6.7 稀释瓶：125 mL 小口玻璃方瓶。 6.8 玻璃试管：(18×180)mm, 平口。 6.9 平皿：直径90 mm。 6.10 刻度吸管：1mL,10mL, 分度至0. 1mL。 6.11 酒精灯。 7 样品 供细菌总数检测的渗沥水实验室样品量约需100mL, 用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。采样后应尽 快检测，在2 h 内不能处理时，应置于温度为2～5℃处，最长保存时间为6h。 8 步骤 8.1 准备工作 8.1.1 工作室及操作台经清扫后，用紫外线灭菌10 min 8.1.2 玻璃器皿置于干燥箱中于160℃灭菌2 h 8.1.3 将装有90mL 生理盐水的稀释瓶和9mL 生理盐水的试管，前者瓶口橡皮塞衬上滤纸条，后者 管口塞上棉花球，置高压蒸汽灭菌器(6.1)内，于121℃灭菌20min, 冷却待用。 8.1.4 将营养琼脂培养基(5.3.2)置于沸水锅内，融化后随即转人(46±1)℃恒温水浴，保温待用。 8.2 试样稀释 8.2.1 以无菌操作，吸取经充分混匀的试样10mL 于盛有90mL 灭菌生理盐水的稀释瓶(8.1.3)中， 充分混匀后就成1:10的稀释液。 8.2.2 吸取1:10稀释液1mL, 沿管壁徐徐注入盛有9 mL 灭菌生理盐水的试管(8.1.3)中，混匀而 成1:100的稀释液。 8.2.3 按上述操作进行10倍递增稀释，每递增稀释1次，随即换用1支1 mL 灭菌刻度吸管。 8.3 倾注平皿 8.3.1 根据试样污染程度大小，选择合适的三个连续稀释度试样进行倾注平皿。在分别作10倍递增稀 释的同时，随即用该稀释度的吸管移取1mL 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度的试样液用2个平皿。 8.3.2 将保温在46℃水浴锅内的营养琼脂培养基倾注于平皿内，并立即转动或倾斜平皿，使稀释液与 培养基充分混合。 同时，将营养琼脂培养基倾入加有1mL 空白灭菌生理盐水的另外2个灭菌平皿作空白对照。 8.4 平板培养 待琼脂凝固后，翻转平板，使底面向上，置于(36±1)℃恒温培养箱内培养(24±2)h。 CJ/T 3018. 14— 1993 292 8.5