DB15T 2149—2021革兰氏阴性菌群体感应信号分子的气相色谱-质谱检测方法.docxVIP

ICS 65.020.30 CCS B40 内 蒙 15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2149—2021 规模化羊场绒山羊舍饲管理技术规程 色谱-质谱检测方法 Test method for quorum sensing molecules of N-acyl homoserine lactones by gas chromatography-mass spectrometry 2021-04-15 发布 2021-05-15 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分： 标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC 19) 归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、伊金霍洛旗文兵农业机械服务企业。 本文件主要起草人：孙海洲、李胜利、张春华、桑丹、金鹿、张崇志、王泽平、刘和平、韩文兵、 王永荣、刘要仙、王生云、敖特更达赖。 革兰氏阴性菌群体感应信号分子的气相色谱-质谱检测方法 1 范围 本文件规定了革兰氏阴性菌群体感应信号分子的气相色谱-质谱检测方法。 本文件适用于反刍动物瘤胃液或肠道食糜中革兰氏阴性菌群体感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单) 适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 群体感应 quorum sensing 在环境中，当微生物种群密度达到一定阈值时，由微生物群体产生的感应信号分子也达到一定浓度， 并通过受体蛋白的信号传递， 将诱导或抑制信号传递到细胞内，来影响其特定基因的表达，以调控微生 物群体生理特征、种群数量和分布的一种微生物群体相互影响行为。 3.2 N-酰基高丝氨酸内酯 acyl-homoserine lactones 由革兰氏阴性菌产生的一类化合物。作为革兰氏阴性细菌中主要群体感应信号分子来调控微生物许 多生理特性基因的表达。 4 试剂和材料 4.1 乙酸乙酯(C4H8O3 )： 色谱纯。 4.2 无水硫酸钠(Na2SO4 ) ：分析纯，在马福炉中于 450 ℃下灼烧 2 h，冷却后，贮于磨口玻璃瓶中密 封保存备用。 4.3 N-丁酰基高丝氨酸内酯 (C4-HSL) ：色谱纯。 4.4 N-己酰高丝氨酸内酯(C6-HSL) ：色谱纯。 4.5 N-辛酰基-高丝氨酸内酯(C8-HSL)： 色谱纯。 4.6 N-癸酰基-高丝氨酸内酯(C10-HSL)： 色谱纯。 4.7 N-十二烷酰基-高丝氨酸内酯(C12-HSL)： 色谱纯。 4.8 N-十四烷酰基-高丝氨酸内酯(C14-HSL)： 色谱纯。 4.9 N- (β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯(3-oxo-C6-HSL) ：色谱纯。 4.10 N-3 氧辛酰- L -高丝氨酸内酯(3-Oxo-C8-HSL)： 色谱纯。 4.11 N-3 氧癸酰- L -高丝氨酸内酯(3-Oxo-C10-HSL)： 色谱纯。 4.12 N-3 氧十二烷酰- L -高丝氨酸内酯(3-Oxo-C12-HSL)：色谱纯 4.13 N-3 氧十四烷酰- L -高丝氨酸内酯(3-Oxo-C14-HSL)：色谱纯。 4.14 高丝氨酸内酯标准储备液制备： 准确称取高丝氨酸内酯标准品 10.0 mg，置于 100 mL 的容量瓶 中，用乙酸乙酯溶解，定容为浓度为 100 mg/L 的标准储备液， 置于-18 ℃冰箱中密封保存， 最长保存 期为 30 d。 4.15 高丝氨酸内酯标准工作液制备： 分别吸取一定量的标准储备液(4.14)，用乙酸乙酯稀释成不 同浓度的混合标准工作液。各混合标准工作液浓度分别为 1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、 100μg/L 和 250 μg/L，共 6 个不同梯度，且现配现用。 5 仪器和设备 5.1 气相色谱质谱联用仪，配有电子轰击源(EI源) 。 5.2 分析天平， 感量 0.0001 g。 5.3 漩涡混匀器。 5.4 离心机，转速 12000 r/min 以上。 5.5 水浴摇床。 6 试样制备 采集瘤胃液或肠道食糜150 mL以上，立即转入预热至39 ℃的保温容器中，混合均匀后经4 层纱布 过滤， 在容器中同时持续通入CO2气体， 保温备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 准确移取20.