核酸分子杂交的原理.docxVIP

核酸分子杂交的原理 DNA杂交，又称为核酸杂交，是一种利用序列非常相似的两种DNA片段结合在一起的技术，用于识别和对比细胞中的核酸或基因，用于定位基因变异。DNA杂交是获得分子进化关系的重要工具，以及用于检测转基因作物的生物技术的发展工具。 它的主要原理是将两种单链DNA片段（母本DNA和一个变异DNA片段）合并在一起形成双链，然后将该双链暴露在特定的酶环境中，并配备合适的引物，以自发结合引物介导的方式发生酶切，最终产生不同大小的片段，以及小片段和大片段是否具有相同类型的序列。 实验中，DNA受体片段先在受体片段介导下按一定规律结合引物，然后由特定酶将受体片段酶切，产生了双链DNA杂交物，由于这种杂交物具有不同DNA序列，因此下一步可以用对应的引物获得更多的片段，以进行进一步的检测。由于杂交检测的特性可以作为定点突变的检测工具，因此DNA杂交可以在大规模基因组测序和表型分析中发挥重要作用，目前已经发展出了多种杂交技术，例如逆转录杂交（RT-PCR），聚合酶链反应（PCR），表达型修饰-聚合酶链反应（ER-PCR），质粒直接DNA杂交（Direct DNA hybridization），基因检测-聚合酶链反应（TG-PCR）等，可以应用于疾病的基因学研究、基因芯片芯片技术及代谢组学等领域。 DNA杂交也可用于生物技术的应用，例如可以利用质粒直接DNA杂交技术，结合十字花科植物田间转座子表型分析，进行秸秆细胞壁合成物质，蛋白质及DNA等各类生物活性组分的高效检测，也可以直接鉴定物种间亲缘关系。 在DNA序列比较方面，DNA杂交可以用于检测不同物种的DNA相似性，以及检测甲基化印迹技术（MSP）和其它所有基因组学分析应用。从而，可以定位某一特定DNA片段中的核苷酸序列变异，并确定这些变异可能引起的表型变化，从而为基因功能鉴定及深入基因分析，以及因果性分析提供有价值的信息。