黑果枸杞及其制品中总花色苷含量的快速测定 pH示差法.docVIP

黑果枸杞及其制品中总花色苷含量的快速测定 pH示差法 范围 本文件规定了黑果枸杞及其制品中总花色苷含量的快速测定——pH示差法的术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、分析步骤、结果计算、结果表示和精密度。 本文件适用于黑果枸杞及其制品（包括保健食品和食品，如黑果枸杞提取物、黑果枸杞片、黑果枸杞胶囊、黑果枸杞口服液、黑果枸杞颗粒冲剂等；饮料类，如黑果枸杞饮料、黑果枸杞酒等）中含量大于8.55 mg/100g总花色苷的测定。 其他植物源性食品（如紫皮茄子、紫薯、紫洋葱、紫甘蓝、紫白菜、大樱桃、紫葡萄、提子、蓝莓、黑树莓、黑豆、黑藜麦、黑米等）及其制品中总花色苷的测定可参照本文件执行。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 术语和定义 3.1 花色苷 anthocyanins 是花色素与糖以糖苷键结合而成的具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的类黄酮。 原理 溶液pH不同，花色苷的存在形式也不同。在pH值很低时，其溶液呈现最强的红色（花烊正离子），随着pH值增大，花色苷的颜色将褪至无色（甲醇假碱和查尔酮），最后在高pH值时变成紫色或蓝色（醌式（脱水）碱）。花色苷发色团的结构转换是pH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随pH变化。根据朗伯-比耳定律，在两个不同的pH下，花色苷溶液的吸光度差值与花色苷的含量成正比。因此，通过两个pH，同一波长（以花色苷最大可见吸收波长）下的吸光度差值以及在700 nm处测得的用于校正略微浑浊供试液的吸光度来求得花色苷含量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 5.1.1 氯化钾：分析纯。 5.1.2 乙酸钠：分析纯。 5.1.3 浓盐酸：分析纯。 5.1.4 无水乙醇：分析纯。 5.1.5 实验用水：应符合GB/T 6682规定的三级水要求。 5.2 试剂配制 5.2.1 乙醇溶液（80%）的配制 量取无水乙醇800 mL于1000 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。 5.2.2 氯化钾缓冲溶液（0.025 mol/L，pH1.0）的配制 称取1.86 g氯化钾固体（准确至±0.001 g）至2000 mL烧杯中，加水约980 mL溶解，加入浓盐酸调节溶液pH值至1.0±0.05后，转移至1000 mL容量瓶中，混匀，定容。 5.2.3 乙酸钠缓冲溶液（0.4 mol/L，pH4.5）的配制 称取54.43 g乙酸钠固体（准确至±0.001 g）至2000 mL烧杯中，加水约960 mL溶解，加入浓盐酸调节溶液pH值至4.5±0.05后，转移至1000 mL容量瓶中，混匀，定容。 6 仪器和设备 6.1 分析天平：感量为±0.0001 g和±0.001 g。 6.2 分光光度仪：具有1 cm比色皿，可在400 nm ~ 900 nm范围内测量吸光度。 6.3 pH计：精度为0.01。 6.4 超声波清洗机：频率40 KHz，温度20 ~ 80 ℃，时间1 ~ 30 min。 6.5 台式离心机：最大容量56 mL，转速4000 ~ 16500 r/min。 6.6 食物粉碎机：可将固体样品粉碎并通过425 μm（40目）筛和250 μm（60目）筛。 6.7 匀浆分散机：处理量1 ~ 2000 mL（H2O），转速3000 ~ 25000 r/min。 7 分析步骤 7.1 试样制备 7.1.1 黑果枸杞鲜果制备 用四分法取适量或取全部，用匀浆分散机以15000 ~ 20000 r/min转速匀浆分散20 s制成匀浆后，立即用于检测，如需加水应记录加水量。整个检测过程应在避光条件下进行，以下相同。 7.1.2 黑果枸杞干果制备 除去可见杂质后，取有代表性试样50 g ~ 100 g，用食物粉碎机粉碎后，过40目筛，混匀后立即用于检测。 7.1.3 黑果枸杞片、颗粒制备 用四分法取适量或取全部，取有代表性试样25 g ~ 50 g，用食物粉碎机粉碎后，过60目筛，混匀后立即用于检测。 7.1.4 黑果枸杞提取物、胶囊制备 胶囊需事先将内容物倒出，然后将试样置于能容纳2 ~ 5倍试样体积的带盖容器中，通过反复振摇和颠倒容器使试样充分混匀均质后立即用于检测。 7.1.5 黑果枸杞口服液、饮料、酒等液体制品制备 通过反复振摇和颠倒盛装容器使试样充分混匀均质后立即用于检测。 7.2 供试品溶液的制备 7.2.1 黑果枸杞固体、半固体试样溶液的制备 7.2.1.1 称取已处理试样一定量（干果0.5 g，鲜果匀浆1.0 g，片剂、颗粒、粉1.0 g，准确至±0.001