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化学遗传学方法全文共138页，当前为第128页。 为了加速筛选过程, 通过使用放射性标记的ATP和组蛋白在96圆片上使酶活化, 然后测量磷酸基自用硝基纤维素滤纸过滤出的蛋白质转移到组蛋白这过程中的所有的放射性。由olomocine起始,几步重复之后可以得到约1000倍活化的purvalanol系列化合物。这些化合物同等程度抑制CDK1和CDK2。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第129页。 （3）Purvalanol在有丝分裂中的作用 如果CDK1和2被抑制, 细胞将有什么发生呢?通过观测有丝分裂的青蛙卵提取物的荧光染色图片，我们可以看到在正常细胞中期阶段, DNA折叠以形成染色体并排成一行。然后微管连到其上将其分到两边。但是, 如果在这个阶段加入purvalanol, DNA不会完全折叠, 微管就找不到它们的连接位点（核DNA染成蓝色而微管蛋白染成红色）。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第130页。 通过对三取代的嘌呤衍生物库的生物活性筛选，不但发现了抑制活性更高的CDK抑制剂，而且还发现了具有其他生物活性的小分子化合物。 如微管蛋白抑制剂myoseverin、雌激素磺基转移酶（EST）抑制剂、糖磺基转移酶抑制剂、微管动力调节剂（diminutol）、肌醇-1,4,5-三磷酸-3-激酶抑制剂、骨质疏松症的诱导剂（purmorphamine）和具有转化变异细胞成为正常细胞功能的reversine等。 这也说明一个结构新颖、多样性的化合物库，可以进行多种不同靶点的筛选。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第131页。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第132页。 2，反向化学遗传学实例-haptamide的发现 （1）二氢吡喃酰胺库的构建 Schreiber小组首先将三个多样性导向合成(diversity-oriented synthesis)组合库所包含的12396个化合物制成三个微阵列，其中二氢吡喃酰胺化合物库（含有6504个化合物）的合成是采用一珠一化合物的固相合成技术，由双噁唑啉铜配合物催化乙烯基醚类化合物、?,?-不饱和酮酯的环加成反应进行的。 其中乙烯基醚另一端含有的羟基与二异丙基硅烷相连，而聚苯乙烯载体也同硅烷连接，在合成的同时，对每一个载体珠进行标记编码，这样当化合物合成完成后，通过烷基化的硅烷将编码的化合物库固定化在微阵列使用的小玻璃板上。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第133页。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第134页。 （2）转录因子抑制剂的筛选 转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录，只有当转录因子(蛋白质)结合在其识别的DNA序列上后，基因才开始表达。 在真核生物体内有许多种转录因子，调节不同的基因进行表达，不同的生物，其转录因子也各有不同。 因此，对不同的转录因子进行抑制，就可以调节生物体内酶或蛋白的活性或含量，从而达到生物反应过程的调控目的。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第135页。 酵母细胞（Saccharomyces cerevisiae）的转录因子Hap由多个亚基构成，Hap3p是转录因子Hap2/3/4/5p的一个亚基，转录因子Hap2/3/4/5p能够导致细胞中癌基因的过度表达，从而导致肿瘤。如果能够抑制Hap3p的活性，将能抑制转录因子介导的蛋白的表达，从而达到控制或治疗癌症的作用。这是一个非常有开发潜力的药物靶点。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第136页。 小分子微阵列的筛选过程：先用纯化的Hap3p-GST融合蛋白溶液与微阵列培育一定时间，洗去没有吸附的蛋白后，用Cy5-抗GST抗体进行检测，根据编码，找到结合了Hap3p-GST融合蛋白的小分子化合物，命名为haptamide A。然后用报告基因筛选模型证实了该化合物的活性，这是第一次筛选。 之后，以haptamide A为模版，改变取代基团，运用目标导向合成方法合成了一个由11个化合物组成的聚焦化合物库(focused library)，并再次使用报告基因筛选模型对这11个化合物进行筛选，从筛选数据中总结小分子的结构与活性的规律，最终得到了一个比haptamide A更为有效的抑制剂haptamide B。 化学遗传学方法全文共138页，当前为第137页。 基因组学、蛋白质组学、组合化学、蛋白质工程、分子筛选等多个领域的交叉为化学遗传学的发展提供了良好的环境，而化学遗传学的发展又为研究蛋白功能和细胞内复杂的生物学过程提供了很好的工具。 选用的小分子化合物的特异性对这种方法的成效有至关重要的作用，这就要求生物学家与化学家一起构建新的多样性的小分子化合物库，设计出合适的筛选方法，确定活性分子的靶