动物源性饲料中猪源性成分的定性PCR检测方法编制说明.pdfVIP

编 制 说 明 一、任务来源 根据国家认证认可监督管理委员会的标准制 ( 修 ) 订计划安排，行业标准《燕窝的分子生 物学真伪鉴别方法》 （计划编号为 2007B149），归口国家认证认可监督管理委员会，由中国检 验检疫科学研究院负责起草工作。 二、编制本标准的目的和意义 燕窝是由雨燕科金丝燕及同属类的唾液凝结而成的物质，是一种名贵的保健食品。由于 燕窝的营养价值较高 ,消费者对其需求日益增长。而燕窝是一种稀缺资源，世界贸易统计每年 收获的燕窝总重量只有大约 2000 吨。正是在这种供需矛盾和巨大经济利益的驱使下，燕窝市 场的掺假掺杂现象十分普遍 ,造假材料主要包括银耳、猪皮、琼脂、果胶、蛋清等，使消费者 蒙受损失。目前缺乏燕窝质量相关的检测标准，十分有必要开展燕窝产品真伪鉴别方法研究 并进行标准化，以保证燕窝市场的规范化运行〔 1，2 〕。 三、编制原则 本标准的编写是按照 GB/T1.1-2000 《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则》 的要求进行的。 本标准是在 “十一五支撑项目” 《功能性食品有效成分检测和鉴伪技术的研究》 的基础上制定的。期间参考了大量国内外相关文献，通过多次实验和反复论证，吸收借鉴国 内外相关经验，在遵循标准科学性、实用性和可操作性的原则基础上，确定了燕窝产品真伪 鉴定的实时荧光 PCR 和双向电泳检测方法标准。 四、国内外文献调研情况 目前燕窝的鉴定方法很多，如表面特征、溶涨性、泡沫、染色、灼烧等简单的物理方法， 微观形态的显微观察方法，蛋白质含量、紫外吸收、氨基酸组成、唾液酸含量、多糖组分等 仪器分析方法。但上述方法存在一些缺陷，例如燕窝是唾液腺的分泌物 , 不存在明显的组织细 胞特征 , 因此显微鉴别的结果可靠性不高；燕窝理化鉴别的物质基础在于其粘蛋白 , 虽有一定 的特异性 , 但由于伪品在制造过程中往往加入一定量的蛋清做粘合剂 , 故理化鉴别专属性不 强；红外光谱法存在样品取样均匀性问题；气相色谱法是以寡糖链成分为分析基础 , 形成燕窝 的单糖指纹图谱以作鉴别，但在生物合成过程 , 糖蛋白中的糖链是通过糖基转移酶从核苷酸糖 将单糖顺次地装配到已形成的糖链受体上 , 最终生成的糖链结构不但决定于每个糖基转移酶 的专一性 , 而且也受到肽链结构和形成异头键能力的影响 , 故糖链的合成过程不是模板化的 , 1 可以终止不同阶段 , 因而糖链结构普遍存在微不均一性。这种微不均一性会影响鉴别结果的可 靠性〔 1，2， 3，4 〕。 相比于上述方法，电泳鉴定是以燕窝所含水溶性蛋白质为分析基础 , 已经证明燕窝的蛋白 质是燕窝药效的物质基础之一。因此 , 理论上电泳中蛋白质谱带的位置、显色的深浅可很好地 反映燕窝的真伪和质量 , 但由于燕窝蛋白富含唾液酸 , 影响其电泳分离效果。本方法采用的双 向电泳法，结合了等点聚焦和 SDS 垂直电泳技术，明显增强了蛋白质分离效果。另外，实时 荧光 PCR法已被广泛应用与物种鉴定，可用于燕窝制品中燕窝成分的快速检测。 五、主要技术内容 （一）材料与方法 1、样品种类及来源 4 份燕窝样品（苏普官燕、云南白燕、瓜目官燕、瓜曼官燕）由浙江杭州胡庆余堂保健品 有限公司提供，另有 5 份燕窝样品（白燕盏）由广东检验检疫局技术中心提供。葱、大豆、 胡萝卜、黄瓜、鸡、鹿、米、木瓜、牛、芹菜、土豆、兔、西瓜、鳕鱼、鸭、羊、玉米、猪、 银耳等 19 份样品购自