dna重组技术的基本工具讲课.pptxVIP

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2021-12-03 发布于上海
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dna重组技术的基本工具讲课.pptx

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第1页/共50页;第2页/共50页;第3页/共50页;第4页/共50页;基因工程需要哪些特殊工具？;第6页/共50页;　;　; 将两个相同的黏性末端之间连接起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。; ⑴有一或多个限制酶切点 ⑵有一个或多个标记基因，便于筛选 ⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 ⑷对受体细胞无害 ; 在实际操作过程中，载体的这些特点能否满足实际需求？ ;;第13页/共50页;EcoRI酶切后的载体和目的基因; 多个EcoRI酶切后的载体与目的基因混合之后，加入 DNA连接酶，其连接产物是否只有一种？ ;载体与目的基因之间的连接;载体与载体之间的连接;目的基因与目的基因之间的连接;载体自身头尾相连接（自身环化）;目的基因自身环化;载体自身环化和目的基因自身环化是干扰重组的常见因素; 为什么EcoRI酶切后会有这么多种连接产物呢？;结论：一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种，相同的黏性末端之间可以任意连接。;基因工程需要的是目的基因与载体连接而成的重组DNA; ;同向插入;反向插入;目的基因插入方向不同将导致出现不同的基因产物; 如何解决目的基因定向插入的问题呢？ ;提示：载体的特点之一：有多个不同的酶切位点。 ;材料：;第32页/共50页;两种限制酶切割产生的黏性末端不同;载体与载体间，目的基因与目的基因间仍可连接;载体及目的基因无法自身环化;正确连接;无法连接;一.载体含有多个酶切位点。二.双酶切： 1.保证目的基因的定向插入。 2.提高DNA的重组率。 ; 拓展提高——筛选含目的基因的重组DNA ;载体特点中除有多个酶切位点外，还携带标记基因。;如何筛选出含目的基因的重组DNA呢？ ;提示：在基因工程的实际操作中，科学家选择的载体往往含有两个或更多的标记基因。;如果在目的基因的插入位置有一个标记基因，当目的基因插入后，标记基因将被破坏而无法表达，从而达到筛选目的。 ;第44页/共50页;　　;反馈练习，巩固提高;反馈练习，巩固提高;反馈练习，巩固提高;反馈练习，巩固提高;感谢您的观看。