4第四章-生物制品生产的基本技PPT课件.ppt

第四章 生物制品生产的 基本技术;第一节 菌(毒、虫)种的选育培养与保藏;（一）、按菌(毒、虫)种的毒力分类;（二）、按菌(毒、虫)种的用途分类;2、检定用菌(毒、虫）种 是指用于检定生物制品效力等菌(毒、虫)种。如效力检验中攻毒用的新城疫强毒，猪丹毒强毒菌种等。另外，还包括用于检定诊断血清交叉反应的菌（毒、虫）种。 3、工具用菌（毒、虫）种 是指在生物制品生产中作为工具使用的菌（毒、虫）种。如基因工程中表达某些异种抗原用的宿主大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌等。;（一）、具有良好的免疫原性;（二）、具有可靠的安全性;在菌(毒、虫)种的选育培养时，尽量降低毒力，保持良好的抗原性，使动物接种后既能产生良好的免疫，又不致于引起发病或损伤。 而在实践中，一般免疫原性与毒力呈正相关，免疫原性强毒力也强。如果采用某种方法使毒力降低，免疫原性也随之降低。用于生产灭活疫苗的强毒都有很好免疫原性，而用于生产活疫苗的弱毒，免疫原性都有一定程度下降。这是选育培养菌(毒、虫)种时需要注意和解决的一个矛盾，从某种意义上讲安全更为重要。;在菌(毒、虫)种的选育培养过程中还要避免污染强毒和其他病原体，尤其是用于活疫苗生产的菌(毒、虫)种。 因为在生产活疫苗时，不加任何灭活剂，使污染的强毒和病原体得不到应有的处理。 对于毒种来说，控制污染外源病原体是较难的。因为用于病毒培养的细胞、鸡胚及动物不易做到完全无污染。;（三）、具有典型的生物学性状;微生物在传代和生产过程中，由于大量增殖时基因突变而表现出某些特性变异。如形态、生化特性、毒力、抗原性及药物敏感性的变异。 人工选育培养弱毒菌（毒、虫)株就是利用毒力变异的特性在一定条件下经多次传代而使毒力减弱的。 然而，选育出的菌(毒、虫)种在用于生产时要注意具有稳定的遗传特性和保持微生物群体的一致性，尤其是毒力和免疫原性的遗传稳定性，以避免毒力返祖和免疫原性下降，从而确保生物制品的质量。;（四）、具有遗传稳定性和一致性;（五）、历史及有关资料清楚完整;生物制品用的菌(毒、虫)种还应该易于培养和大量繁殖，并能稳定地达到和保持较高的滴度。 用于生产类毒素和抗毒素的菌种，应该能够大量产生外毒素。对于某些生物制品还应考虑提取、纯化手段等。;三、菌(毒、虫)种的选育培养方法;（一）、自然选育培养法;分离到菌 (毒、虫)株的毒力，抗原性往往都不同。 某些自然分离的菌(毒、虫)株毒力很强，如自然分离的多杀性巴氏杆菌等。这些强毒株适于制造灭活菌、诊断抗原和检定用。 有些自然分离菌(毒、虫)株毒力很弱，抗原性也较好，如鸡新城疫Bl株弱疫苗，L系弱毒、马立克氏病SB-l弱毒株等，这些弱毒株适于制造弱疫苗。 在自然弱毒中还包括由异种动物引用过来的菌(毒、虫)株，如用火鸡疱疹病毒预防鸡马立克氏病、鸽痘病毒预防鸡痘，也有用牛病毒性腹泻-粘膜病弱毒株预防猪瘟等。这些菌(毒、虫)株是由于在自然条件下流行或传代过程中适应存在和变异的结果。;自然选育培养菌(毒、虫)种时，首先从分离的菌(毒、虫)株中选择形态特征、培养特性、理化特性典型的，并与相应诊断血清出现明显血清学反应的菌(毒、虫)株，然后再测定其毒力和免疫原性。 测定时首先用实验动物进行初选，然后再用原宿主动物测定。 毒力测定一般是先选用敏感的实验动物，鸡胚或细胞培养物等，测定菌(毒、虫)株的半数致死量（LD50），最小致死量（MLD），半数感染量（ID50）或者是半数鸡胚致死量（ CELD50 ），半数鸡胚感染量（CEID50 ）、半数细胞感染量（TCID50 ）等。;在测定时，还应设生理盐水或培养液阴性对照和同种菌(毒、虫)种的阴性对照，以免得出错误结论。 如果阴性对照动物发病，则实验不能成立； 如果阴性对照不发病，则对结论应慎重。 免疫原性测定是使对菌(毒、虫)种免疫敏感的动物产生免疫力，然后再用强毒攻击，如果动物不发病死亡则表明有一定的免疫原性。如果分离的菌(毒、虫)株有数种，可分别免疫，然后交叉攻击感染以确定抗原谱。 作为菌(毒、虫)种应选用的免疫原性好，且抗原谱广，能提供交叉保护的菌(毒，虫)株。;（二）、人工选育培养法;人工选育培养法就是分离的菌(毒、虫)株在培养和传代过程中采用某些理化和生物学方法诱发其发生变异，使毒力减弱或消失而仍保持一定的免疫原性。 有的毒力致弱后毒力稳定，用于制苗的代数不受限制；也有的在继代时免疫性亦随之丧失，制苗使用代数较窄。 入选的微生物要经过毒力和免疫原性稳定性测定，在培养基中连续传代后不改变的，说明稳定性良好且有使用价值。 人工选育培养菌(毒、虫)种可具体分以下几种方法。;1、物理学方法 主要包括以下几个方面。 （1）温 度 各种微生物都有其最适宜的生长繁殖温度，如果改变温度可引起发生变异，以适应环境。再通过选择生产性能比较稳定的变异株，如