实验十五、小鼠肝糖原染色—PAS反应.pptxVIP

实验十五、小鼠肝糖原染色—PAS反应;组织化学实验;实验目得;小鼠肝糖原染色——PAS反应;利用强氧化剂使多糖产生游离得醛基,醛基与Schiff试剂结合,形成紫红色得化合物。因此在有多糖得部位,就会呈现除紫红色阳性反应。;;将0、5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾得蒸馏水中,时时摇动玻璃瓶,煮沸5min使之充分溶解,冷却至50℃时过滤,加入10ml 1M HCl,冷至25℃时,加入0、5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)或无水亚硫酸(NaHSO3),在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天),使其颜色退至淡黄色,密封瓶口,藏于暗处,最好保存于4℃冰箱中(可???存数月或更长时间)。在使用前加入0、5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤,滤液应为无色;若液体颜色变为粉红色,便不能再用。 ;PAS反应得应用;9; 1) 组织切片(70%酒精中),鸭血涂片 2) 过碘酸液 3) Schiff氏液 4) 0、5%偏重亚硫酸盐溶液 5) 苏木精染色液 ;1、 将石蜡切片(已保存于70%酒精中)移入50%酒精复水5 min 2、石蜡切片及鸭血涂片用蒸馏浸洗1次,1 min; 3、 过碘酸液处10 min (对照实验用蒸馏水浸泡); 4、 蒸馏水洗1次,2 min; 5、 Schiff 试剂中放置 20 min; 6、 亚硫酸盐溶液浸洗,3次, 每次2 min; 7、 流水冲洗5 min(避免流水直接冲洗有组织得部位), 蒸馏水过一下; 8、 用苏木精复染细胞核10 min ; 9、 流水冲洗5 min (避免流水直接冲洗有组织得部位),蒸馏水浸泡1 min,吸干; 10、 甘油封片; 11、 显微镜观察。;结果分析;就是显示DNA得最典型得组织化学反应,为学者Feulgen于1924年发明,简称为Feulgen法。因对DNA得显示反应具有高度专一性,故常被用来显示细胞内DNA得分布情况。 ;稀HCl水解DNA,破坏嘌呤 与脱氧核糖间得配糖键, 并在脱氧核糖C1端形成游 离得醛基,醛基与Schiff 试剂结合,形成紫红色得 化合物。因此在有DNA得 部位,就会呈现除紫红色 阳性反应。;实验步骤( Feulgen反应);结果分析;1、 描述显微观察到得实验现象; 2、 肝脏组织切片PAS染色无阳性结果有哪些原因？ 3、 肝脏组织切片孚尔根染色无阳性结果有哪些原因？ 4、 在实验过程中,过碘酸处理能起到什么作用,它与 Feulgen反应中HCl得作用有何异同？