薄膜过滤法微生物限度检查操作要点之欧阳文创编.pdf

欧阳文创编 薄膜过滤法微生物限度检 查操作要点 时间：2021.03.12 创作：欧阳文 1. 设备、仪器 1.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室， 每个无菌室应有独立的净化空气系统。 1.1.1 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流 装置。环境洁净度不应低于 10000 级，局部洁净度为 100 级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工 作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于 4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉 球，大、小橡皮乳头等。 1.1.2 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、 帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂 物。 1.1.3 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其 消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净 化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。 1.1.4 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化 装置 30min，将备妥的营养琼脂平板 3 个（经 30～35C0 预培养 48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作 间，置净化台左、中、右各 1个，开盖，暴露 30min 后 0 将盖盖上。在 30～35C 培养箱内倒置培养 48h，取出检 查。3个平板生长的平均菌落数不超过 1个。 1.2 仪器 1.2.1 恒温培养箱 （30～35C）、生化培养箱0 欧阳文创编 欧阳文创编 0 （23～28 C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。 1.2.2 玻璃器皿 烧杯、培养皿、量筒、试管及 塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂 水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双 层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽 121℃灭菌 30min，烘干。或于 160℃干热灭菌 2h，备用。 2 培养基及其制备方法 2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基 34g，加 1000ml 蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌 15 分 钟。 2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养 基 30.5g，加 1000ml 蒸馏水，加热溶解，分装，121℃ 高压灭菌 15 分钟。 2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基 36g，加 1000ml 蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌 15 分 钟。 3 稀释剂 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠 9.0g，加水 溶解使成 1000ml，121℃灭菌 20 分钟。 3.2PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢 钾 3.56g，磷酸氢二钠 7.23g，氯化钠 4.30g，蛋白胨 1.0g，加水 1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。 4 供试液的制备 4.1 取供试品 10g，加经干热灭菌的 5%吐温-80 0.2ml ，加 PH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液稀释至 100ml，边加边振摇使成混悬液，静止 5 分钟使分层，倾 取上清液置离心机中 500r/min 离心 5 分钟，取上清液作 欧阳文创编 欧阳文创编 为供试品溶液。 5 检查方法 采用薄膜过滤法，滤 膜孔径为 0.45um，直径为 50mm。滤膜及滤器在使用前采用 121℃高压灭菌30 钟。 试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供 试液过滤，然后用 100mlPH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲 液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗 后，用镊子取出滤膜