生物产品分析与检验技术葡萄糖酸测定葡萄糖酸的分析与检验-异羟肟酸比色法.pptxVIP

《生物产品的分析与检验》有机酸的分析与检验 -----葡萄糖酸的分析与测定主讲教师：张 惠葡萄糖酸含量的测定方法二 —异羟肟酸比色法用异羟肟酸比色法测定发酵液中葡萄糖酸的含量（一）测定原理葡萄糖酸在酸性条件下发生内酯化，形成的内酯与羟胺碱反应，生成异羟肟酸。异羟肟酸与FeCl3能生成有色络合物，从而可通过分光光度比色法定量分析葡萄糖酸的含量（ 二）试验仪器可见分光光度计（三）所用试剂及其配制1.标准溶液的配制：用葡萄糖酸钠配制0.100 mol/L的标准溶液储备液。使用时根据需要稀释至不同浓度的标准葡萄糖酸溶液。2.盐酸羟胺与NaOH混合试剂：配制4 mol/L盐酸羟胺溶液和4 mol/L的NaOH溶液，低温保存。使用时，将等体积的盐酸羟胺和NaOH混合，混合后pH值为8.0。配制的溶液应在4 h内使用。3. FeCl3试剂：FeCl3和HCl的混合溶液，其中FeCl3和HCl的浓度分别为0.37 mol/L和0.1 mol/L。（四）样品测定将样品溶液稀释一定倍数后，在10 mL带有磨口塞的试管中各加入0.5 mL标准溶液或者样品，再加入0.5 mL去离子水，混合均匀后，沸水浴中加热20 min，冷却至室温。然后顺序加入2 mL盐酸羟胺和NaOH混合试剂、1 mL 4mol/L HCl和1 mL FeCl3试剂，混合均匀，这时反应混合物的pH为1.2±0.2。放置10 min后比色(波长505 nm)，以空白管(用0.5 mL去离子水替代样品溶液，其余试剂用量与前相同)校零，读取各管的吸光度 OD505值。测定工作在10 min内完成。（五）标准曲线绘制分别配制0、1、2、4、8 mmol/L的葡萄糖酸钠溶液，按照前述的方法测定其吸光度(OD505)值，作出葡萄糖酸与OD505的标准曲线。（六）结果计算样品中葡萄糖酸的含量按下式计算：式中：C---样品溶液中葡萄糖酸的含量，mmol/L；C1---从标准曲线上查出的葡萄糖酸的含量，mmol/LF---样品溶液的稀释倍数。