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溶剂对反相液相色谱中峰形影响 Solvent effect the HPLC performance in reversed phase Chromatography 忆峰（Yvan Lee） -201405-Sino 摘要:随着分析仪器的不断更新，HPLC 在常规分析工作中担任着愈来愈 重要的角色。其中反相色谱的高性价比及通用性，一直在高效液相色谱 法中占较大的比例。关于色谱洗脱条件的筛选，建立，许多文献集中在 流动相与色谱柱的调整，而样品溶剂相关的文章则较少。笔者以实际工 作经历中发现不同溶出介质对色谱峰形的影响为基础并结合相关的文 献，就样品溶剂对反相液相色谱中峰形的影响进行了一个的归纳与总结。 并对其中的机制提出了一些浅显的论述。 关键词: 体外溶出;HPLC ;溶剂效应;峰形异常;缓冲容量;表面活性剂;离 子对试剂;方法开发 Abstract: As the analytical apparatus developing, HPLC is more and more popular and important, and reversed phase chromatography plays a big role for its cheaper and suitability. There are lots articles about setting the HPLC method focus on Mobile phase and column screening, but little on diluent. The author summaries some influences of sample solvent in reversed phase chromatography according to the daily experiments and references. Some mechanisms are presented in this article also. Keyword: Dissolution; HPLC; solvent effect; abnormal peaks; buffer capacity; surface active agent; PIC; method development 高效液相色谱法由于其专属性好，灵敏度高，分析快速等优点被广 泛的使用在食品，化妆品，药品，石油化工，地质环境监测等诸多领域。 HPLC 按色谱柱填料的性质又分为反相色谱，正相色谱，离子交换色谱， [1] 空间排阻色谱，手性色谱等 。其中反相色谱由于其普适性原因占到了 HPLC 分析中大部分。 色谱分析者在工作中会经常遇到色谱峰型异常的问题。这一般可以 归结为峰过载，色谱柱柱头筛板堵塞，色谱柱损坏，系统死体积增大， [2] 二次保留，溶剂效应等 。当出现色谱峰峰形异常时，进一针低样本量 （如1uL），若峰型正态基本就可以断定为溶剂效应。溶剂效应对峰型的 影响有展宽，保留时间的飘移，峰面积的变化，分叉，双峰等[1~3，4] 。这 在定性与定量分析中都会导致分析工作者对结果的误判，对此笔者结合 相关文献和实际工作经历就反相色谱中溶剂效应的几种不同作用机制做 了以下简单的总结。 1. 溶剂强度 此处所述的溶剂强度指溶剂使用的是与流动相兼容的有机体系。 色谱分析者经常会遇到样品水溶解性不佳的问题，最简便的处理方式之 一便是以流动相中的纯有机相稀释并溶解样品。一般情况下都可以得到 [3] 满意解决，然偶尔也会发生峰形变异的问题。王丽 等在按照 《中国药 典》2010 版二部测定瑞格列奈其左旋异构体时发现，以甲醇配置的 0.1mg/mL 的样品溶液的色谱峰形状随着甲醇的比例减低峰型趋于正态， 60%的甲醇/流动相A 溶剂时才得到理想峰型。见图X。 Organic phase strength in dilute impacts the performance of repag