非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范 DB37_T 4032—2020 山东.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4032—2020 非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范 Technical specification for isothermal amplification detection of African swine fever 2020 - 07 - 09 发布 2020 - 08 - 09 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 4032—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东师范大学、中国动物卫生与流行病学中 心、山东鼎科检测技术有限公司、潍坊安普未来生物科技有限公司、上海基灵生物科技有限公司、潍坊 汉森生物饲料科技有限公司。 本标准主要起草人：孙文博、吴家强、陈蕾、殷斌、陈智、吴晓东、蒋文明、刘国宪、郑乾坤、李 敏、杜以军、于江、时建立、吴香菊、李俊、丛晓燕、郭立辉。 I DB37/T 4032—2020 非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范 1 范围 本标准规定了非洲猪瘟病毒（ASFV），英文缩略表见附录D，核酸的重组酶聚合酶扩增（RPA）检测 技术的要求。 本标准适用于非洲猪瘟的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 核酸恒温扩增技术是依赖解旋酶解开双链DNA，依赖单链DNA结合蛋白与模板单链结合，使模板处于 单链状态并保护它的完整性。引物与模板杂交，然后在DNA聚合酶的催化下开始扩增。 4 试剂或材料 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级水。 4.2 1×PBS 溶液(pH值 7.4)：配制见附录A.1。 4.3 核酸提取试剂： a) 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL）：配制见附录A.2； b) 10 %十二烷基硫酸钠（SDS 溶液，pH7.2）：配制见附录A.3； c) Tris 平衡酚； d) 三氯甲烷； e) 70 %乙醇：配制见附录A.4。 4.4 重组酶聚合酶恒温扩增试剂盒。 4.5 DEPC 水。 4.6 恒温扩增检测的引物：恒温扩增检测引物见附录 B.1。 4.7 无水乙醇。 4.8 微量移液器配套的带滤芯吸头。 4.9 离心管：1.5 mL。 5 主要仪器设备 1 DB37/T 4032—2020 5.1 微量移液器：最大量程分别为 10 μL、20 μL、100 μL、1 000 μL。 5.2 生物安全柜。 5.3 普通冰箱。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 研磨管。