直抗阳性和免疫溶贫.pptxVIP

抗球蛋白试验 - 检测 IgG通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集。可分为直接和间接抗球蛋白试验。直接抗球蛋白试验检查受检者红细胞在机体内是否被抗体致敏产生直抗阳性的条件 自身免疫溶血性贫血 溶血性输血反应 新生儿溶血病间接抗球蛋白试验证实红细胞在体外被抗体结合的试验 是检查血清中IgG抗体特异性 或红细胞抗原的重要手段可用于 未知抗体的检出与确认 交叉配合试验 确认抗原间接抗球蛋白试验步骤1：致敏步骤2：洗涤步骤3：加入抗人球蛋白试剂（AHG） 增强介质 可以增强反应性和减少孵育时间LISS 电解质增加溶液的介电常数，减弱了抗原抗体的静电作用。降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合率Polybrene 碱性高分子物质，有效中和红细胞表面负电荷，降低zeta电位，缩短红细胞之间的距离PeG 极强的亲水性，减少红细胞与抗体周围的水分22％Bovine albuminEnzymes增强介质柱凝集（Column agglutination）固相技术（Solid-phase technology）复合方法Red blood cells panelPlasma or serumScreen DiluentNanoLysAnti-Human Globulin (AHG) ScreenDiluentNanoLysScreenLys抗体筛选方法1.DispensingH1H2H360 μl of Screen Diluent12 μl of serum or plasma60 μl of NanoLys15 μl of Hemascreen1,2,32. Incubation 20’ at 37°C3. Shake and Magnetize in the same timeMAGNETMAGNETMAGNETMAGNET抗体筛选方法DAT阳性血液标本的收集EDTA抗凝血 提供红细胞 DAT测定，定型，洗脱，自身吸收不抗凝血 提供血清 抗体筛选，抗体鉴定DAT阳性血清学研究多特异性抗球蛋白，抗IgG，抗C3 测定附着在红细胞上的免疫球蛋白的类型血清抗体筛选与鉴定 自身抗体，同种抗体 自身＋同种抗体放散试验 确认附着抗体的特异性直抗（IgG）阳性，而血清与洗脱液皆无反应 需进一步研究： 药物处理细胞，A和B细胞，酶处理细胞红细胞鉴定定型 ABO/Rh，磷酸氯奎放散，收集网织红细胞DAT IgG，C3放散 阴性：A和B细胞，酶处理，药物处理细胞 阳性：同种抗体，自身抗体，同种＋自身自身吸收 血清抗体鉴定阳性 自身抗体 温抗体，冷抗体 同种抗体 特异性鉴定 自身吸收鉴定同种抗体阴性 IgG抗A，抗B抗体 酶处理细胞 药物依赖抗体抗体放散方法方法用途要点Lui freeze-thawABO HDFN快速；红细胞用量少；其它抗体难放散Heat(56 0C)ABO HDFN；IgM凝集抗体容易；IgG同种和自身抗体难放散酸放散试剂盒温自身和同种抗体容易；当高效价的抗体存在时放散液有假阳性洋地黄皂苷酸温自身和同种抗体洗涤消耗时间乙醚放散温自身和同种抗体红细胞疾病红细胞增多红细胞减少 红细胞生成减少 红细胞破坏过多（溶血性贫血） 红细胞丢失过多溶血性贫血红细胞内在缺陷 遗传性红细胞增多症 红细胞酶缺乏的贫血 珠蛋白生成障碍性贫血 异常血红蛋白病 阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞外来因素 免疫溶血性贫血 机械性溶血性贫血 其它因素引起的溶血性贫血免疫溶血性贫血的分类自身免疫溶血性贫血（AIHA） Warm AIHA (WAIHA) Cold Agglutinin Syndrone (CAS) Mixed-type AIHA Paroxysmal Cold Hemoglobinura (PCH) DAT-negative AIHA同种免疫溶血性贫血 Hemolytic Transfusion Reaction Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN)药物诱发的免疫溶血性贫血 Drug-dependent Drug-independent自身免疫溶血性贫血的血清学特征WAIHACASMixed-type AIHAPCHDATIgGIgG+C3C3C3 onlyIgG+C3C3C3 only免疫抗体类型IgGIgMIgG,IgMIgG放散液IgG抗体没有反应IgG抗体没有反应血清IAT；在20 C，35%未凝集IgM凝集抗体，4 C效价1000 (60%)IgG IAT-反应抗体和IgM凝集抗体在DLT试验中IgG双相溶血特异性广范围反应；多种特异性报道通常为抗I通常未知抗P温抗体型自身免疫溶血性贫血(WAIHA)