绿色荧光蛋白.pptxVIP

绿色荧光蛋白——将色彩引入生命科学研究;绿色荧光蛋白的分子生物学及其应用;The Nobel Prize in Chemistry 2008;2008年诺贝尔化学奖获得者及其贡献;1962年Shimomure等首先从维多利亚水母(Aequorea Victoria)中分离出了GFP (Green-Fluorescent Protein) 。; A test tube containing a sample of a cyan (greenish-blue) fluorescent protein from a sea anemone illuminated by ultra-violet light from below. ;;水母发光蛋白发出的蓝光通过能量转移激发GFP发出绿光 水母发光蛋白 脱辅水母发光蛋白+氧化荧光素+蓝光 绿色荧光蛋白 绿光 水母素在钙离子的刺激下发光，其能量可转移到GFP上，刺激GFP发光。这是物理化学中已知的荧光共振能量转移（FRET）在生物中的发现。;下村修;1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构。;马丁·沙尔菲; 绿色荧光蛋白的研究史;钱永健;之后很快发现GFP能在多种异源细胞中表达，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮。 1997年10月18-22日在美国New-Jersey专门召开了一次关于GFP的国际会议。;2007年1月7日，东北农业大学刘忠华教授主持的转基因克隆猪课题获得成功。中国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。这是继美国、韩国、日本之后第四例成功通过体细胞核移植方式生出的绿色荧光蛋白转基因克隆猪。 ;绿色荧光蛋白的结构解析;绿色荧光蛋白的结构解析;绿色荧光蛋白的结构解析;绿色荧光蛋白的结构解析;绿色荧光蛋白的结构解析; The green fluorescent protein GFP consists of 238 amino acids, linked together in a long chain. This chain folds up into the shape of a beer can. Inside the beer can structure the amino acids 65, 66 and 67 form the chemical group that absorbs UV and blue light, and fluoresces green. ; The dimer contact region. The two polypeptide chains associate over a broad area, with a small hydrophobic patch (in the yellow box) and numerous hydrophilic contacts. The two-fold symmetry axis is in the plane of the page, and is marked by the red arrow. The polar residues are marked with red atoms for oxygen and blue for nitrogen. ;绿色荧光蛋白的发光特性;绿色荧光蛋白的发光特性;GFP需要在氧化状态下产生荧光，强还原???能使GFP转变为非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。中度氧化剂对GFP荧光影响也不大，如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。 但GFP对某些封片指甲油特别敏感。 GFP荧光在pH7.0-12.0稳定，在pH5.5-7.0开始受到影响，高温(70℃)、极端pH或胍基氯化物条件下，GFP会变性，荧光消失，一旦外界条件恢复正常，荧光将部分恢复。; GFP发色团的骨架在左边。蛋白质链形成一个圆柱形罐头（蓝色），子链的一部分直接从中间穿过（绿色），发色团刚好在罐头盒的中间，它被保护起来以免受周围环境的影响。这种保护对于发射荧光是必需的。一但发色团吸收一个光子，激活的水分子通常就会夺取它的能量。但是在蛋白质内部改为发射能量稍低的光子来释放能量，使它得到了保护。发色团（右图）由蛋白质链上的三个氨基酸：甘氨酸，酪氨酸和苏氨酸（或丝氨酸）自发形成。;绿色荧光蛋白的发光基团;GFP荧光生色团; Stereo view of the fluorophore and its envi