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记得有次在在线课程的微信群讨论时， 有同学问我关于液相色谱柱的再生问题。 今天就来给大家讲讲如何进行色谱柱的再生。 通常情况下， 对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低需要考虑再生时， 建议大家用以下流程来进行冲洗： ? ·??【冲洗流程】??· ? ···········? 1 ?··········· 20倍柱体积水：乙腈= 95%：5% （用于移除系统中缓冲盐，可根据常用缓冲盐浓度调整比例） ···········? 2 ?··········· 20倍柱体积 乙腈 ···········? 3 ?··········· 5倍柱体积 异丙醇 ···········? 4 ?··········· 20倍柱体积 正己烷 ···········? 5 ?··········· 20倍柱体积 乙腈 20倍柱体积 水：乙腈=95%：5% （可与步骤1保持相同的比例） ···········? 6 ?··········· 用所需的流动相比例重新平衡色谱柱 ? 关于色谱柱的再生，我相信大家能看到很多相关文章， 建议大家可以根据实际需求来选择再生条件。 老师今天要和大家讲的是关于上文给出的条件的柱体积的问题。 ·············································································? 实际上在色谱柱冲洗时， 很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。 例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。 然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。 例如这次提到的20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱是指什么呢？ 其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。 ·??【公式如下】??· ? 通过公式就很容易算出柱体积了， 例如一根4.6mm内径，150 mm柱长的色谱柱柱体积为： 如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈， 假设你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈冲洗34分钟。 当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。 不知道这样的解释大家能理解么？ 以后在色谱学堂微信群和大家讨论色谱柱冲洗时， 记得不要只和我说你曾经冲洗色谱柱用多少时间， 还要说流量哦！ 最后提醒大家， 冲洗色谱柱时，色谱柱的尾端不要接检测器， 接一个可以收纳废液的容器就行了。 为了应对不同类型的分析项目， 实验室里常常会配置三种柱子： 一根弱极性柱，一根中等极性柱，和一根强极性柱。 那么，所谓的强极性柱，该选哪一种呢？ — END —
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