高效液相色谱分析(12).pptVIP

（四）在医学检验中的应用 体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测： 合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。 天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等 （五）在无机分析中的应用 阳、阴离子的分析等。 用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定重组人肿瘤坏死因子(rh-TNF)衍生物的相对分子量 仪器与色谱条件：岛津LC-10A HPLC 色谱柱：Beckman Ultraspherogel SEC 3000(30cm×7.5cm) 流动相 0.1mmol/L KH2PO4 :0.1mmol/L Na2SO4(1 : 1) + 0.05% NaN3 流速: 1mL/min 检测波长:280nm 标准蛋白相对分子量曲线的制备： 选用四种蛋白：醛缩酶、血清白蛋白、碳酸酐酶及抑蛋白酶肽制成的混合标样。考虑流速等因素对保留时间T的影响而选用了内标法，既在混合标样中加入右旋糖酐蓝和酪氨酸作为内标，进样后可同时测得完全排阻和完全进入填料孔的两种内标的保留时间T0和Tt，用分配系数Kd对相对分子量对数作图，从而保证结果有良好的重现性。 根据样品的保留时间T求出其分配系数Kd，由Kd从标准蛋白相对分子质量曲线上查出相应的lgMr，计算相对分子质量。 制备色谱 泵 进样器 柱 检测器 馏份收集器 331制备泵 215 液体处理系统 (配备低位大流量收集阀) 322分析泵 柱切换阀 156UV/VIS检测器 ELSD检测器 112UV/VIS检测器 制备色谱 小规模制备 制备量10 mg/循环 半制备 制备量 10 – 50 mg/循环 大规模制备 制备量0.5 – 1.0 g/循环 工业制备 制备量 20g/天 根据色谱柱的柱径大小分类： 柱径 4.6 mm 分析柱 柱径 4.6 – 20 mm 半制备柱 柱径 20 – 100 mm 制备柱 柱径 100 mm 工业制备柱 分类 分析型HPLC，主要考虑的是柱效。要求信噪比小、检测下限低。 制备型HPLC，要求分离物的纯度要满足一定的条件，样品要回收，进样量和回收量的多少与经济效益直接相关。 色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 制备色谱与分析色谱的区别 制备型液相色谱 preparative liquid chromatography 进行制备色谱纯化前，首先用分析色谱摸索分离条件。 制备色谱纯化样品时，在产品纯度达到要求后，产品的费用往往是优先考虑的因素，以便节约投入，提高效益。因此，在制备色谱中常常使用的是非线性进样。 制备色谱的要求 制备色谱的目的 收集样品中指定的一种或多种成份 所关注的是: 纯度 (分离的好) 数量 (制备容量足夠) 时间 (分离速度快) 成本 (花费低) 制备方法 建立制备色谱方法: 以分析柱、分析及流速來确定最佳流速和理想的分离梯度。 按比例扩展: 将分析条件按比例扩大到制备级条件，求得制备柱的最佳负荷能力 T。 每次进样量 T = (毫克/分) 每次分离时间 制备收集: 以制备级条件进行分离及收集馏份。 纯度检验: 在分析条件下测定馏份纯度。 进样量: 制备柱的线性容量 (线性进样量, mg) C = π ? dc2 ? L / 8000 Dc- 柱內径 (mm), L – 柱长 (cm) 250 X 21.2 mm制备柱线性进样量为44 mg 流速 制备柱径dc (prep)2 制备流速 Fprep = 分析流速 Fanal x 分析柱径dc (anal)2 液相制备色谱收集组分的方法 可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率； 两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 主组分的分离纯化 多组分的分离纯化 微量组分的分离纯化 制备型液相色谱 制备色谱中的峰切割收集 收集 A 收集 B 循环 超临界流体色谱 在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间，称为SCF。 （1）可处理高沸点、不挥发试样； （2）比LC有更高的柱效和分离效率。 超临界流体性质 密度类似液体，因而溶剂化能力很强，压力和温度微小变化可导致其密度显著变化 压力和温度的变化均可改变相变 粘度、扩散系数接近于气体,具有很强传递性能和运动速度 SCF的介电常数，极化率和分子行为与气液两相均