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初级检验技师测验 ———————————————————————————————— 作者： ———————————————————————————————— 日期： 2．细胞因子测定方法及应用 测定方法： （1）生物学检测法： 又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为： 细胞增殖法； 靶细胞杀伤法； 细胞因子诱导的产物分析法； 细胞病变抑制法。 （2）免疫学检测法： 细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性。可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子。常用的方法包括ELISA、RIA及免疫印迹法。 （3）分子生物学方法： 目前公认的细胞因子的基因均已克隆化，较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点，甚至从l～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA。 临床应用： 细胞因子测定可作为特定疾病诊断的辅助指标，用来评估机体的免疫状态、判断治疗及预后，用于临床治疗应用时的监测等。 （十六）细胞黏附分子的测定技术 同学们应重点掌握：1．细胞表面黏附分子的测定：2．可溶性黏附因子的测定：3．了解临床应用 白细胞和血管内皮细胞、巨噬细胞和上皮细胞等以及血液中均存在细胞粘附分子。 按其结构特点，分有钙离子依赖性家族、整合素家族、免疫球蛋白超家族和选择素家族四大类。 1．细胞表面粘附分子的检测 （1）放射免疫测定法： 通常用抗细胞粘附分子抗体包被载体，加受检样品后，继加相应单克隆抗体和同位素标记的二抗作非竞争性固相放射免疫测定法。 （2）荧光免疫测定法： 用不同激发波长的荧光素着染色受检细胞，在FACS仪上可同时检测有两种不同的细胞粘附分子。 （3）酶免疫测定法： 主要为双抗体夹心ELISA，本法应用最广，但仅能检出一群细胞的表面粘附分子数量，而不能反映单个细胞粘附分子数量的变化。 （4）其他方法： 如酶免疫组织化学测定、流式细胞仪分析、时间分辨荧光免疫测定等。 例题：下列哪一种测定方法不属于细胞表面黏附分子的检测方法： A．酶免疫测定法 B.放射免疫测定法 C.流式细胞仪分析 D.PCR E．荧光免疫测定法 答案：D 2．可溶性粘附分子的检测： 多采用双抗体夹心ELISA，研究最多的选择素家族和免疫球蛋白超家族。前者有E、L、P三型，均可见血液中。对于P、L、E选择素在临床中的应用也需要掌握，哪些疾病出现这三种选择素升高现象。 3．临床应用： 了解。 （十七）免疫球蛋白检测及应用 同学们应重点掌握：1．熟练掌握免疫球蛋白（Ig）的概述2．掌握Ig测定及临床意义 3．掌握M蛋白的检测及意义4．掌握冷球蛋白测定 1．免疫球蛋白的概述 （1）免疫球蛋白(Ig)： 是由浆细胞产生，存在于血液和体液（包括组织液和外分泌液）中，也可作为抗原受体表达于B细胞表面。多数Ig具有抗体活性，可以特异性识别和结合抗原。抗体是机体在抗原刺激下，由浆细胞合成分泌产生的具有与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，即具有免疫功能的球蛋白。所有的抗体均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。 （2）化学结构 ①Ig的基本结构： Ig分子由4条肽链借链间二硫键连接组成，即2条相同的重链(H)和2条相同的轻链(L)和几对二硫键连接成一个基本单位，称为单体。IgG、IgE、IgD及多数血清型IgA皆为单体，分泌型IgA为双体，IgM为五聚体。免疫球蛋白分子H链（VH和CH），L链分（VL和CL）。 ②功能区： Ig分子的H链与L链各区段可通过链内二硫键折叠成彼此相似球状结构，担负特定免疫学功能，称为功能区。L链有两个功能区，称为VL、CL。 ③Ig的水解片段： Ig分子可被许多蛋白酶水解，产生不同的片段。 （3）免疫球蛋白的血清型 ①同种型； 类和亚类： 根据Ig重链恒定区的结构不同和抗原特异性的不同分类。 型和亚型： 根据轻链恒定区肽链抗原特异性的不同，分两型。 例题：免疫球蛋白的型及亚型分类依据是 A．VH抗原性的不同 B．CL抗原性的不同 C．CH抗原性的不同 D．VL抗原性的不同 E．CV抗原性的不同 答案：B ②同种异型； ③独特型： 抗原决定簇可在异种、同种异体以及自体内诱导产生相对应的抗体，称为抗独特型抗体。独特型和抗独特型抗体将整个抗体组成一个网络，称独特型网络。 （4）免疫球蛋白的生物学活性 抗体是具有双功能分子，它既可特异性结合抗原，又可独立诱发或执行一系列生物学效应，由抗体分子不同部位分别执行。 与抗原结合作用： 具有特异性结合。 补体活化作用： 补体C1q与游离Ig分子结合非常微弱，而与免疫复合物中的IgG或IgM（经典途径）或凝聚Ig（替代途径）结合则很强