第1章脑科学研究的方法.ppt

5、免疫印迹法（immunoblotting 或western blotting）鉴定生物分子： 是将电泳凝胶分离出来的电泳带移到特殊的滤膜上，再利用标记抗体与滤膜上某一蛋白质或肽的特异结合，使其显色。 优点：一是将传统的电泳凝胶染色法的敏感度提高了100~1000倍，二是RIA与相似，能从多种蛋白质中选择鉴定出一种特异的蛋白质，其敏感性可达1ng，同时又能知道这一蛋白质的分子量，这又是RIA无法达到的。 6.电泳 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。 电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳技术有很多种方法，介绍最常用的两种： 水平板式电泳槽 垂直板式电泳槽 稳压稳流电泳仪 蛋白质SDS电泳 染色结果 琼脂糖凝胶电泳 天然琼脂（agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（agarose，约占80%）及琼脂胶（agaropectin）组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷，而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象。因此，目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳。????????琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定核酸: 如重组质粒的鉴定，DNA酶谱制作等。 琼脂糖浓度与DNA分离范围 琼脂糖浓度 /% 线状DNA大小/kb 0.5?? ? ?0.7???? 1.0?? ?1.2???? 1.5??? ?2.0 30-1?? 12- 0.8 ? 10-0.5 7-0.4??3-0.2?? 2-0.05 凝胶的制备与电泳 样品配制与加样 染色和拍照 五、 分子生物学方法 １、神经生物学研究中常用的分子生物学方法 基因的分子克隆 克隆后的基因在人工体外表达系统或细胞中的表达 克隆后的基因作为探针研究基因表达的组织特异性和发育阶段特异性 研究基因转录调控区的结构特征有助于理解基因转录调控机制 2、聚合酶链式反应（PCR）： 在神经生物学研究中有广泛的用途，如可应用它发现和分析新基因，测定mRNA ３、反向遗传学利用制造体内基因突变的方法研究基因及其产物的功能： 通过制造定向突变改变生物表型的方法与传统遗传学所采用的通过生物表型确定其基因型的方法相反，故称反向遗传学。 ４、遗传连锁分析法分离遗传病基因： 人类基因组由23条染色体组成，基因组内大约包含5~10万个基因，其中40%在脑内表达。约有1000多种遗传病具有明显的中枢神经系统症状，占已知遗传病总数的三分之一。 六、脑成像（Brain imaging）技术 利用各种方法和技术来摄取人及动物颅骨和颅内组织结构的摄像，从而了解其异常的技术。可以反映颅骨的密质差异、颅腔以及其他邻近结构。 1、颅骨X射线照相术：以基本的X射线设备和X射线照像技术即可获得颅骨的X射线照片。 ２、同位素脑扫描(Isotope brain scanning)： 检查脑损伤，将特定的同位素标记物给观察对象静脉注射，待标记物进入脑部后，即以射 线扫描仪或r摄像机获得系列扫描图。 ３、脑超声波(Cerebral ultrasound) ４、脑血管造影术(Cerebral angiography) ５、计算机断层扫描术（Computerized tomography, CT） ６、核磁共振成像(Magnetic resonance imaging, MRI) 7、正离子发射断层扫描术（position emission tomography,PET）：是利用发射正电子的同位素作为标记物，将其引入脑内某一局部地区参与已知的生化代谢过程，利用现代化计算机断层扫描技术将标记物所参与的特定代谢过程的代谢率以立体成像的形式表达出来。可测量脑组织对G的利用和脑的局部血流量 BRAINS from a healthy aged adult (left) and a patient with Alzheimer’s disease (right) differ markedly. The execess of dark shading in the second image shows that brain activity is impaired. Positron Emission Tomography (PET，正电子发射计算机断层显像) O15 Water FDG or F18 fluorodeoxyglu