GB/T 25168-2010畜禽cDNA文库构建与保存技术规程.pdf

ICS 65. 020. 30 B 40 中华人民共和国国彖标准 GB/T 25168—2010 畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 Technical regulation of farm animal cDNA library construction and preservation 2010-09-26 发布 201 1-03-01 实施 GB/T 25168—2010 前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：马月辉、关伟军、 陆涛峰、李向臣、佟春玲、余露露、刘鹏。 I GB/T 25168—2010 畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 1范围 本标准规定了畜禽cDNA文库构建方法。 本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、 、鹅等畜禽cDNA文库构建与保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 cDNA complementary deoxyribonucleic acid 以成熟mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成的cDNA链。 3.2 cDNA 文库 cDNA library 将处于特定发育阶段真核生物体的特定器官或组织中提取的总RNA,经过反转录等一系列的生化 反应合成双链cDNA群体后，再插入到适当的载体上，经转化寄主菌株构成特定的cDNA克隆群体。 3. 3 寡核昔酸 oligonucleotide 一类只有20个以下碱基对的短链核苗酸的总称，常用作探针确定DNA或RNA的结构。 3.4 噬菌斑 plaque 被噬菌体感染的细菌所释放的子代噬菌体，会继续感染周围的细胞，致使在琼脂平板上生长的菌苔 中有大量的细胞发生裂解，形成的透明区域。 4试剂及溶液配制 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682 -级用水的要求。 4. 1 焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate, DEPC)处理水 在1 000 niL去离子水中加人1 mL DEPC,37 °C静置12 h,高压灭菌(120 °C 30 min) „ 4. 2 2 mol/L MgSO4 称取 246. 50 g MgS() ・ H,O,加 400 mL 双蒸水(double distilled H2O,ddH2O)溶解后，定容到 500 mL,高压灭菌。 4. 3 10 mmol/L MgSO4 量取 1 mL 2 mol/L MgS() 加 ddHgO 定容到 200 mL,高压灭菌，30 min0 4. 4 1 mol/L Tris-Cl(pH7. 5) 称取121. 1 g Tris,碱溶于800 mL ddl^O中，调pH至7. 5,定容到1 L,高压灭菌。 4.5 SM缓冲液 称取 5. 80 g NaCl、2. 00 g MgSO ・ 7H2(),量取 50 mL 1 mol/L Tris-Cl(pH7. 5)和 5 mL 2%(质