GB/T 28630.2-2012白斑综合征(WSD)诊断规程　第2部分：套式PCR检测法.pdf

ICS 65. 020. 30 k_ _ b41 中华人民共和 国 国彖标准 GB/T 28630.2—2012 白斑综合征(WSD)诊断规程 第2部分:套式PCR检测法 Diagnostic protocols for white spot disease — Part 2: Nested PCR method 2012-07-31 发布 2012-11-01 实施 GB/T 28630.2—2012 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 GB/T 28630 《白斑综合征(WSD)诊断规程》分为五个部分： ——第1部分:核酸探针斑点杂交检测法； ——第2部分:套式PCR检测法； ——第3部分:原位杂交检测法； ——第4部分:组织病理学诊断法； ——第5部分:新鲜组织的T-E染色法。 本部分为GB/T 28630的第2部分. 本部分按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。 本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、农业部全国水产技术推广总站。 本部分主要起草人:黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成银、杨丛海、魏琦、刘莉。 T GB/T 28630.2—2012 白斑综合征(WSD)诊断规程 第2部分:套式PCR检测法 警告：使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验 ，本标准并未指出所有可能的安全问题。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施 ，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1范围 GB/T 28630的本部分规定了白斑综合征病原的套式PCR检测方法所需试剂与材料、仪器设备、 操作步骤和结果判定。 本部分适用于在对虾的各种样品、环境生物和饵料生物的各种样品 ，以及其他各种非生物样品中对 白斑综合征病原带毒情况的高灵敏度定性检测，以进行病原筛查和疾病的确诊。 本部分单独使用时不适用于对病毒量或感染活性的估测以及宿主感染程度的评估。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 。凡不注日期的引用文件 ，其必威体育精装版版本(包括所有修改单)适用于本文件。 GB/T 28630. 4—2012白斑综合征(WSD)诊断规程 第4部分:组织病理学诊断法 3 原理 3. 1白斑综合征的病原和病理学特征 见 GB/T 28630. 4—2012 的 2. 1。 3.2技术原理 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是以待测样品的一段DNA作为模板 ，以与模板 两端序列互补的一对特异性寡核昔酸序列作为引物，在四种脱氧核糖核昔三磷酸存在下，利用依赖 DNA的DNA聚合酶的合成作用 。经过数十次变性、退火和延伸的反应循环，使模板上介于两个引物 之间的DNA片段得到特异性地级数扩增，再通过电泳等手段检测到被特异性扩增的片段，从而可揭示 微量病毒DNA的存在 。套式PCR是在第一步PCR扩增的产物内，再用一对引物进行第二步PCR扩 增 。套式PCR可大大增加PCR检测的灵敏度和反应特异性。 4试剂和材料 4. 1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的化学试剂和蒸憾水或去离