GB/T 34750-2017副猪嗜血杆菌检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 34750—2017 副猪嗜血杆菌检测方法 Detection methods for haemophilus parasuis 2017-11-01 发布 2018-05-01 实施 发布 GB/T 34750—2017 ■ r ■ —— 刖 弓 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提 。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位:河南省动物疫病预防控制中心、河南省农业科学院畜牧兽医研究所 、河北农业大 学动物科技学院 、山东省农业科学院畜牧兽医研究所。 本标准起草人:吴志明、闫若潜、张健、赵明军、赵雪丽、宋勤叶、徐引弟、王东方、王淑娟、安春霞、 刘梅芬 、张盼盼、谢彩华、高凤山、方先珍、吴家强、拜廷阳、王一、刘淑敏。 T GB/T 34750—2017 副猪嗜血杆菌检测方法 1范围 本标准规定了副猪嗜血杆菌的分离与鉴定、巢式PCR检测和实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于对猪的肺脏、心脏、脑等组织，胸腔、腹腔、心包积液或关节液，抗凝血，细菌培养物等 样品中副猪嗜血杆菌的检测。 2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp：碱基对 (Base Pair) DNA :脱氧核糖核酸 (Deoxyribonucleic Acid) dNTPs :脱氧核糖核昔三磷酸(Deoxyribonucleoside Triphosphates) MGB：小沟结合(Minor Gr ve Binder) NAD：烟酰胺腺瞟吟二核昔酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide) PES：磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Solution) PCR：聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) Taq 酶：Taq DNA 聚合酶(Taq DNA Polymerase) TE：Tris-EDTA 缓冲液(Tris-EDTA Buffer) TSA：胰蛋白豚大豆琼脂(Tryptic Soy Agar) TSB：胰蛋白腺大豆肉汤(Tryptic Soy Broth) 3仪器 3.1生物安全柜。 3.2恒温培养箱。 3.3光学显微镜。 3.4全自动微生物鉴定仪。 3.5 PCR扩增仪。 3.6 高速冷冻离心机 (12 OOOXg以上)。 3.7核酸电泳仪和水平电泳槽。 3.8恒温水浴锅。 3.9 单道微量移液器 (0.5 #L〜10 ptL；2 〜20 pL；20 〜200 卩L； 100 〜1 000 #L)。 3.10组织匀浆器或研钵。 3.11凝胶成像系统(或紫外投射仪) 3.12实时荧光定量PCR仪。 4耗材 4.1 1.5 mL无菌离心管。