GB/T 34745-2017猪圆环病毒2型　病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 34745—2017 猪圆环病毒2型 病毒SYBR Green I实时 荧光定量PCR检测方法 Porcine circovirus type 2 —Method of detecting virus by SYBR Green I real-time PCR 2017-11-01 发布 2018-05-01 实施 发布 GB/T 34745—2017 、 ■ 1 冃IJ s 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位:河南农业大学 、中国动物卫生与流行病学中心。 本标准主要起草人:魏战勇、郑兰兰、邵卫星、胡慧、陈红英、王亚宾、王学兵、崔保安、寇亚楠。 I GB/T 34745—2017 猪圆环病毒2型 病毒SYBR Green I实时 荧光定量PCR检测方法 1范围 本标准规定了 SYBR Green I实时荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型的技术要求。 本标准用于检测猪圆环病毒2型核酸，适用于临床样品中猪圆环病毒2型的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Ct 值:循环阈值(Cycle Threshold) DNA :脱氧核糖核酸 (Deoxyribonucleic Acid) EDTA :乙二胺四乙酸(Ethylcnediaminetetraacetic Acid) PES：磷酸盐缓冲溶液(Phosphate Buffer Saline) PCR：聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) PCV2：猪圆环病毒 2 型(Porcine Circovirus Type 2) PMWS：仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystcmic Wasting Syndrome) Taq 酶：Taq DNA 聚合酶(Taq DNA Polymerase) 心 值：解链温度(Melting Temperature) 4试剂 除非另有规定，仅使用分析纯试剂 。所有试剂均用无RNA酶污染的容器(用DEPC水处理后高压 灭菌)分装。 4.1蛋白酶K(配制见附录A)：-20 °C保存。 4.2裂解缓冲液(配制见附录A)；4 °C保存。 4.3异硫氧酸呱裂解液(配制见附录A)：4 C保存。 4.4平衡酚(配制见附录A)：4 °C保存。 4.5酚-氯仿-异戊醇 (25 : 24 : 1)混合液(配制见附录A)：4 °C保存。 4.6氯仿-异戊醇(24 : 1)(配制见附录A)：4 °C保存。 4.7氯仿:常温保存。 4.8异丙醇：常温保存。 4.9 70%乙醇:用新开启的无水乙醇和灭菌去离