GB/T 14926.51-2001实验动物　免疫酶试验.pdf

ICS 65. 020. 30 , ... 、 844 E 目 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.51—2001 实验动物免疫酶试验 Laboratory animal —Immunoenzyme assay (IE A) 2001-08-29 发布 2002-05-01 实施 雷家鶯星免盃佥謹恵胃发布 GB/T 14926.51—2001 .”台 、亠 刖 旨 本标准修订了 GB/T 14926. 18— 1994«实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免 疫酶试验方法，将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位 ：中国实验动物学会。 本标准主要起草人:贺争鸣。 T 中华人民共和国国家标准 实验动物免疫酶试验 GB/T 14926.51—2001 Laboratory animal —Immunoenzyme assay (IE A) 1范围 本标准规定了免疫酶试验(IEA)所用试剂、器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 2原理 含有病毒抗原的细胞固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物 。此抗原抗体复合物仍保持 其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应 。在普通显微镜下，根据颜色 的反应判定结果。 3主要试剂与器材 3. 1试剂 3. 1. 1抗原片 3. 1. 1. 1抗原片的制备 将病毒接种敏感细胞(表1),待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后,用胰酶消化分 散细胞,PBS洗涤三次，最后用适量PBS悬浮细胞 。将细胞悬液滴于玻片孔内 。同时消化不感染病毒 的同批同种细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照 。孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为 宜 。室温干燥后，冷丙酮(4 €)固定10 mino用蒸懈水漂洗后充分干燥，置于一2(TC备用。 3. 1. 1.2抗原片的鉴定 每批抗原片在使用前，用相应的阳性血清和阴性血清进行鉴定 。鉴定方法可用IEA或免疫荧光试 验 。在阴性血.清与正常细胞和病毒感染细胞反应无色 ；阳性血清与正常细胞反应无色，而与病毒感染细 胞呈棕褐色，且阳性细胞数达30%〜50%时，此批抗原片可以使用。 3. 1.2酶结合物 抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴IgG抗体辣根过氧化物酶结合物用于检查相应动物的血清抗 体 。葡萄球菌蛋白A(SPA)辣根过氧化物酶结合物可代替抗小鼠 、豚鼠、兔、犬和猴IgG抗体辣根过氧 化物酶结合物使用。 3. 1. 3 阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、猴所获得的抗血清 ；或自然 感染恢复后的犬、猴血清。 3. 1. 4阴性血清 清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清；或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清。 3. 1. 5 PBS(0. 01 mol/L,pH7. 4) 氯化钠 8 g 氯化钾 0.2g 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施