体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用解读.pptVIP

体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用 * 【目的】 通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用 【原理】 肝组织内含有细胞色素P450,可致戊巴比妥钠代谢失活，从而影响其催眠作用 * 【器材与药品】 剪刀 天平 小镊子 10ml移液管 培养皿 注射器 10ml离心管/试管 离心机 试管架 恒温水浴箱 95%氧气和5%二氧化碳混合气体 0.4%戊巴比妥钠溶液 玻棒 【实验对象】 小白鼠 * 【肝损伤模型】 硫代乙酰胺（TAA） 其原理是TAA入肝后延长肝细胞有丝分裂过程，并阻碍RNA从胞核到胞质的转移，进而影响依赖酶的代谢过程，最终形成肝细胞坏死.肝实质的破坏引起间质内织缔组织的生成增多，从而引起纤维组织在局部的沉积，其形成的动物模型在血流动力学、形态学及功能上的改变均与人肝硬化相似. 方法：每组取4只小白鼠，称重，分别腹腔注射硫代乙酰胺0.15ml/10g，造肝损伤模型 * 【步骤与方法】 1.取离心管及试管各5支，分别标记为A、B、C、D、E 2.取正常小鼠和肝损伤小鼠各两只，颈椎脱臼处死，置方盘内剖腹暴露肝脏， 注意保持胆囊的完整，先去除胆囊，再取肝脏 * 【步骤与方法】 3.用镊子小心取出肝脏，置于生理盐水中漂洗，并将胆囊摘除，滤纸吸干，放在天平上称取1克肝组织（一只小鼠的肝脏） 4.将称好的肝组织放在离心管口，用小剪刀剪碎 5.A、B、C、D、E各管中均准确加入0.4%戊巴比妥钠溶液5ml。同时置于37℃恒温水浴中孵育，A、C管孵育30min，B、D、E管孵育1h，培养期间每10min通入气体一次 * 【步骤与方法】 6.将上述孵育液3000r/min离心5min，然后将上清液移至相应的A、B、C、D、E试管内 7.取小白鼠10只，分为A、B、C、D、E五组，每组2只，称重后均按0.1ml/10g 分别腹腔注射相应A、B、C、D、E管内上清液 * 【流程图】 A B C D E 正常肝 1g 正常肝 1g 受损肝 1g 受损肝 1g 0.4%戊巴比 妥钠溶液5ml 37℃孵育 通气 30mim 60mim 30mim 60mim 60mim 3000r/mim 5mim 取上清液 2只 2只 2只 2只 2只 记录给药时间、翻正反射消失及恢复时间 腹腔注射 * 【注意事项】 肝分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性 肝切片孵育过程中，应经常用玻璃棒搅动离心管中的内容物，以使肝切片与药物充分发挥作用 培养液内通气时气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面 * 【实验结果】 组别 处理 给药时间 翻正反射 消失时间 翻正反射 恢复时间 睡眠潜伏 期/min 睡眠持续 时间/min A B C D E 正常肝孵 育30min 正常肝孵 育60min 受损肝孵 育30min 受损肝孵 育60min 未处理 * 【预测结果】 睡眠潜伏时间 E C D A B 睡眠持续时间 E C D A B * 【讨论】 戊巴比妥钠经肝、受损肝组织孵育后，对小鼠的睡眠有什么影响？为什么？ * 【结论】 1.戊巴比妥钠经肝脏代谢 2.戊巴比妥钠有镇静、催眠作用 * 药物代谢 药物作为一种异物进入体内后，机体要动员各种机制使药物发生化学结构的改变，即药物的转化或称生物转化又称药物代谢，从体内消除，代谢是药物在体内消除的重要途径 体内各种组织均有不同程度的代谢药物的能力，但肝脏是最主要的的药物代谢器官 体内药物代谢有一部分不经酶促而自动发生，但绝大多数药物是通过特异性细胞酶催化的 * 巴比妥类药物的抗惊厥作用 * 【目的和原理】 了解大剂量中枢兴奋药尼可刹米的中毒表现－－惊厥 观察巴比妥类的抗惊厥作用 * 【实验步骤】 取体重相近的小白鼠2只，分别编号、标记 两只分别腹腔注射生理盐水和0.5% 戊巴比妥钠溶液0.15ml/10g 15min后，分别皮下注射5%尼可刹米溶液0.1ml/10g，盖好笼盖，观察现象 * 【流程图】 1号 2号 0.15ml/10g 生理盐水 i.p. 0.15ml/10g 0.5%戊巴比妥钠 i.p. 15min后 0.1ml/10g 尼可刹米 s.c. 观察现象 * 【结果】 注射生理盐水的小鼠出现惊厥 注射戊巴比妥钠的小鼠没有出现惊厥 * 尼可刹米：对延脑呼吸中枢有直接兴奋作用，可提高中枢对CO2的敏感性。还可通过刺激颈动脉体和主动脉体化学感受器