生物素亲和素反应的放大技术.pptxVIP

生物素-亲合素放大技术;第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记 　一、理化特性 　二、亲合素（或链酶亲合素）的标记;第三节 生物素-亲合素系统的特点一、灵敏度　二、特异性三、稳定性　四、适用性五、其他;生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。;生物素（维生素H） 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 分子量小，244.31 D;一、活化生物素 ;活化生物素;活化生物素;如何减小空间位阻;标记蛋白质醛基的活化生物素;标记蛋白质巯基的活化生物素;标记核酸的活化生物素;特性： 活化生物素通过侧链与蛋白分子连接； 一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性（是BAS多级放大作用的物质基础）； BNHS多标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质, BHZ则多标记微酸性抗原；抗原、抗体标记后活性不变； 可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后，活性降低；;注意事项： 选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基团 的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性； 控制生物素：蛋白质比例 生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度 0.5~5μg/ml; 生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab； 使用交联臂减少空间阻力;第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记; 结构 四亚基糖蛋白 四肽链蛋白 无糖基 PI 10.5 6 结合位 色氨酸 色氨酸 生物素 4 4 Ka 1015 1015 活性 13～15U 15～18U;二、亲合素/链霉亲合素的标记;第三节 生物素-亲合素系统(BAS)的特点;;第四节 生物素-亲合素系统的应用;一、生物素-亲合素系统基本类型及原理;BA法，也称标记亲合素-生物素法: （labeled avidin-biotin,LAB） Ag+B·Ab Ag-Ab·B A·E/SA·E Ag-Ab·B-A/SA·E 特点：以A·E/SA·E代替BAB法中的A/SA，省却了加B·E的步骤 ;3. ;;此外，按待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗体，BAS分为直接法和间接法。;二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用;三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用;四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用;五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用;思考题;小 结;在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测示踪剂??均是待测抗原与生物素化抗体反应形成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素结合（BA、LAB法），或依次与亲合素（链霉亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放大，提高检测方法的灵敏度。