第二章 微生物的纯培养和显微技术.pptVIP

第二章 微生物的纯培养和显微技术 微生物的纯培养和显微技术 重点：微生物的分离和纯培养技术，常 用的菌种保藏方法。细菌、放线菌、霉菌、酵母菌的形态特征。 第一节微生物的分离和纯培养 一、无菌技术 概述 （1）培养物：微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物。 （2）纯培养物和纯培养的概念：微生物学中，将由一个细胞（或一种微生物）繁殖所得到的后代称为纯培养物。对微生物这种纯种的培养，称为微生物的纯培养。 （3）无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染的技术称为无菌技术。 一、无菌技术 1·1微生物培养的常用器具及灭菌 常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿等 注：所有器皿使用前都要灭菌！ 培养基：培养微生物营养物质。 注：配制好后要及时灭菌。 常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌、 干热灭菌 高压蒸汽灭菌（P153） 干热灭菌 一、无菌技术 1·2接种操作 接种：在无菌条件下，用接种环或接种针等工具把微生物从一个器皿转接到另一个器皿，叫做接种。是最常用的基本操作。 二、用固体培养基分离纯培养 概述 菌落：由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。 菌苔：固体培养基表面众多菌落连成一片，呈片状， 这就是菌苔。 平板：即培养平板，指盛有固体培养基的平皿。 二、用固体培养基分离纯培养 2·1纯种微生物的分离：在自然界中，各种各样的微生物总是混杂在一起的，要研究和利用某一微生物，就必须把它同其他微生物分开，才能得到只含有同一种微生物的纯种微生物。这种方法叫纯种微生物的分离 2·2纯种微生物的分离方法 ·稀释到平板法 ·涂布平板法 ·平板划线分离法 ·稀释摇管法 1. 稀释倒平板法（pour plate method） 　　先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 2. 涂布平板法 　　其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落 由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。 三、用液体培养基分离纯培养 稀释法：适用于原生动物和藻类的分 离和培养。 特 点：高度稀释、多做平行对照。 思考：有什么缺陷性？ 有些目的微生物尤其是含量较少的微生物往往被稀释掉！ 此时可采用单细胞分离法。 四、单细胞分离 显微分离法——单细胞 分离法 用毛细管提取单个原生 动物个体 用显微操作仪分离单个细菌 适用于分离混杂微生物中弱势群体。 五、选择培养分离 选择培养分离：根据微生物的营养、生理、生长条件等特点，通过选择培养进行微生物的分离与纯化技术。 5·1用选择培养基进行直接分离 选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制非需要菌的生长，促进需要菌的生长，这种培养基叫选择培养基。 高氏一号培养基加10%酚数滴，抑制其它菌的生 长，分离出放线菌 马丁氏培养基加链霉素以抑制其它菌生长，分离出真菌。 五、选择培养分离 5·2 富集培养：不同微生物间的有不同特点，根据这些特点制定特定的环境条件，使需要的微生物生长旺盛，数量增加，从而更容易分离到该微生物。 加富培养基：一般指在培养基内加入额外的营养物质，使需要的微生物营养更充分，生长的更快，这种培养基叫加富培养基。 土悬液—培养基+硫磺—分离出硫杆菌 土悬液—以羟基苯甲酸为唯一碳源的培养基——分离出能降解羟基苯甲酸的微生物。 六、二元培养物 纯培养物： 只含有一种微生物的培养物叫做纯培养物。 混合培养物： 含有两种以上微生物的培养物叫做混合培养物。 二元培养物: 只含有二种微生物的培养物而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养叫做二元培养物。 例如：