流式细胞仪检测胞浆内抗原MPO的实验和临床研究-内科学专业论文.docxVIP

复旦大学硕士生论文剂和其他不同实验条件对实验结果的影响，尝试系统评价FCM检测胞浆内抗原 复旦大学硕士生论文 剂和其他不同实验条件对实验结果的影响，尝试系统评价FCM检测胞浆内抗原 MPO的基本实验方法，并提出FCM检测的推荐方案。与以往文献报告采用临床 患者检测不同，本文采用HL一60细胞株作为研究对象，细胞株各细胞之间具有 齐同性，克服了临床样本之间的差异以及自血病抗原表达的异质性如抗原表达缺 失，抗原表达不同步等，使实验结果更为可信。据我们的实验结果，提出FCM 检测胞浆内抗原MPO的推荐方法如下：样本放置时间在室温下应小于24小时。 调整样本细胞数为10×10 9／L：取100ul置于Falcon管中，加入FACS破膜剂1 ×500ul，振荡混匀，避光反应15分钟；加入PBS2ml，300×g离心5分钟，弃 上清；加入PE标记的MP020ul，振荡．混匀后避光反应30分钟左右：加入PBS2ml， 300×g离心5分钟，弃上清；加入PBS2ml，200×g离心5分钟，弃上清；加入 PBS0．5ml重悬浮。分别以空白管(未加抗体)调整电压，相应阴性对照管划定 阴性细胞区域，然后检测标本阳性细胞比例、平均荧光强度算术均值(MFI)和 平均荧光强度几何均值(MFIgeo)，计算相对荧光指数RFI和RFIgeo。 检测急性白血病微小残留病(MIm)的指标应在急性白血病中高表达，而在 正常人骨髓中低表达或不表达。临床41例急性白血病的免疫表型分析显示，MPO 对急性粒单系白血病具有较高的系列特异性，24例急性粒单系白血病中23例表现 为MPO阳性，达到95．8％。CD34作为干祖细胞标志，在白血病细胞表面常有较 高表达，本实验显示41例急性白血病中，36例表达CD34，达到87．8％。CD45／SSC 比起传统的FSC／SSC设门可以更好的显示白血病幼稚细胞群。因此我们推测由 CD34、MPO和CD45组合而成的表现型应该在急性粒单系白血病中有较高的表 达。临床病例检测表明CD34+／MPO+／CD45叫m“表现型在急性粒单系白血病中有较 高的系列特异性，阳性率达到80％左右。在正常人骨髓细胞中，CD34+’／MPO+／CD45 一m“只有极低表达，约10一5左右。表明CD34+／MPO+／CD45一棚j“确可作为检测微小 残留病MRD的理想指标。在用CD34+／MPO+／CD45州“表达的HL-60细胞株建立 的微小残留病细胞模型上，比较MD．FCM方法检测CD34+／MPO+／CD451““与免 疫组化方法(APAAP法)，虽然APAAP法可以将形态学和免疫特征相结合，有直 观、形象的特点，但其敏感性较MD—FCM差2—3个数量级，MD．FCM可以达到 10一，而APAAP法仅有10～一10一。因此流式细胞仪在检测微小残留病时具有更 高的灵敏度，作为检测MRD方法，比APAAP法更适合。本实验遂利用 复旦火学硕士生论文CD34+／MPO+／CD45一““来监测急性粒单系白血病患者的微小残留病(MRD)，MRD 复旦火学硕士生论文 CD34+／MPO+／CD45一““来监测急性粒单系白血病患者的微小残留病(MRD)，MRD 的检出标准定为10～。检测7例CD34+／MPO+／CD45“小”表现型的AML患者，显 示随着化疗的进行，该表现型细胞逐渐减少。发现二例患者在白血病复发前 CD34+艄Po+／CD45刊”阳性细胞增多，提示MRD扩大；一例患者在完全缓解期 间该表现型消失，但在一月后，再次出现该表现型，其MRD复发比临床形态学检 测到自血病复发提早约90天左右。由于目前国内外没有相应资料来借鉴，因此在 临床应用中，需要进一步积累病例，总结经验。 关键词：流式细胞术FCM MPO 微小残留病(MRD) 复旦大学硕士生论文Laboratory 复旦大学硕士生论文 Laboratory and Clinical Research Of Cytoplasmic Antigen MPO Detection by Flow Cytometry(FCM) Abstract Objective： To evaluate the method of detecting cytoplasmic antigen MPO by flow cytometry(FCM)．and study the methodological factors affecting flow cytometric analysis．Preliminarily assess the clinical value of CD34*／MPO+／CD45一mi” immunophentotype for immunological detection of minimal r