蜡梅花β-葡萄糖苷酶的活性分析、分离纯化与性质的初步研究-园林植物与观赏园艺专业论文.docxVIP

蜡梅花13一葡萄糖苷酶的活性分析、分离纯化 蜡梅花13一葡萄糖苷酶的活性分析、分离纯化 与性质的初步研究 摘要 0．葡萄糖苷酶是香花中醇系香气形成的关键酶类。本文在优化B一葡萄糖苷酶 提取以及活性分析条件的基础上，比较蜡梅不同品种和鲜花开放不同时期0．葡萄糖 苷酶活性的变化，并首次对蜡梅花13．葡萄糖苷酶进行分离纯化和有关酶学性质的研 究，为今后深入研究蜡梅花香形成机理提供理论依据。本项研究主要研究结果如下： 1．蜡梅花13．葡萄糖苷酶提取和活性分析条件的优化。 以pNPG为底物，对蜡梅花中B．葡萄糖苷酶提取和活性分析条件进行了研究。 结果表明，PVP加入量对酶活性影响较大。随着PVP加入量的增大，酶活性呈现上 升的趋势．当PVP加入量与花等量时，酶活性达到最大值。缓冲液类型和pH值对 酶活性也有较大影响。随着pH值的增大，酶活性均呈现先增后减的趋势，当pH为 5．0时酶活性达到最大值。在相同pH条件下，柠檬酸．柠檬酸三钠提取的酶活性最大。 酶的吸收波长分析结果表明，在波长为410nm下测定B．葡萄糖苷酶，能获得最大的 光吸收值。酶促反应以37C为宜，在此条件下反应120分钟内酶活性分析结果具有 稳定性。据此，t3．葡萄糖苷酶提取条件为：加入与花等量的PVP，以pH为5．0的 柠檬酸．柠檬酸三钠作为提取缓冲液：而13．葡萄糖苷酶活性分析的条件为：酶促反 应温度为37℃，反应时间为120分钟内，测定波长为410hm。 2．蜡梅不同品种和鲜花开放不同时期B．葡萄糖苷酶活性变化 素心蜡梅I、素心蜡梅II、罄口蜡梅和狗蝇蜡梅花中13．葡萄糖苷酶活性变化的 研究表明，从黄蕾到全开过程，素心蜡梅II花中B．葡萄糖苷酶活性均高于其它蜡梅 品种，素心蜡梅I和罄口蜡梅居中，而狗蝇蜡梅最低。在鲜花开放的不同时期，不 同蜡梅品种鲜花B．葡萄糖苷酶活性的变化趋势大体上一致，均表现为黄蕾初开 全开青蕾萎蔫，从黄蕾到全开过程B．葡萄糖苷酶活性略有下降，但保持在较高 水平，而从全开到萎蔫的过程酶活性下降迅速。提示蜡梅花香气的变化与内源B． 葡萄糖苷酶的活性有关。 3．B．葡萄糖苷酶的分离纯化 采用硫酸铵分级沉淀法和CM．52 Cellulose离子交换层柝法对素心蜡梅lI花中13． 葡萄糖苷酶进行分离纯化，得到Glucosidase．I、Glucosidase—II和Glucosidase．IIB个 酶级分。利用Sephadex G一100葡聚糖凝胶柱层析对主要级分Glucosidase．III进一步纯 化，能得到纯度较高的0．葡萄糖苷酶主要级分Glucosidase—III，该酶的纯化倍数提高 了12．6倍，得率为2．4％，比酶活为0．244U／mg。 4．B-葡萄糖苷酶的酶学性质研究 Glucosidase—III酶学性质研究表明，该酶最适pH为4．0，在pH4．O一6．0之间比较 稳定，最适温度为50℃，热稳定范围在30℃一40℃之间：Glucosidase．III酶可能由 稳定，最适温度为50℃，热稳定范围在30℃一40℃之间：Glucosidase．III酶可能由 分子量为64．5KD和42．0KD的两种亚基组成；对底物pNPG的米氏常数K。为 o．23mmoI／L，最大反应速度V二。为12．24U／L；H矿+、Ag+、SDS对Glucosidase—Ill 有强的抑制作用，Cu”、Fe”对酶有一定的抑制作用；在4C下保存一个月，酶活性 仍在80％以上。由此说明蜡梅花的Glucosidase—III对底物有着很强的亲和力，其热 稳定性不高，活性明显受某些金属离子和抑制剂的影响。 关键词： 蜡梅B．葡萄糖苷酶提取活性分离纯化酶学性质 2 Preliminary Preliminary Studies on Activity,Purification and characterization of B-glucosidase in Chimonanthus praecox L． Abstract B-glucosidase is one of the key enzymes，which plays an important role in alcoholic aroma formation of fragrant flowers．Under the optimized conditions for the enzyme extracting and activity analysis，we compared the changes of B—glucosidase activity during different stages of florescence among different cultivars of Chimonanthu